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第一章LOX-1／NF-κB信号途径对氧化低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞表达TLR4的影响及氟伐他汀的干预作用背景与目的目前认为动脉粥样硬化是一种免疫炎症性疾病。Toll样受体4(TLR4)是介导天然免疫和炎症反应的一种模式识别受体，对动脉粥样硬化的发生发展起着非常重要的作用。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作为致动脉粥样硬化的独立危险因素，可通过其特异性受体—血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)结合、摄取及降解并介导其生物学功能。TLR4与LOX-1在粥样斑块内皮细胞中均有高表达。已证实ox-LDL诱导巨噬细胞TLR4表达上调，提示TLR4在脂质介导的促炎症反应中发挥作用；脂多糖(LPS)可通过TLR4／NF-κB途径上调LOX-1的表达，加剧动脉粥样硬化的进程。这些表明，TLR4与LOX-1在动脉粥样硬化免疫炎症反应中关系紧密。NF-κB作为核转录因子，它可诱导TLR4的表达及调节其下游信号传导，由而推测可能存在LOX-1／NF-κB—TLR4信号通路，故本章探讨TLR4与LOX-1的相互作用和调节机制，及氟伐他汀对该信号通路的调节作用，从而为动脉粥样硬化防治提供新的理论依据。方法培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)，予ox-LDL刺激及LOX-1中和抗体、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸酯(PDTC)和不同浓度氟伐他汀进行干预，采用RT-PCR技术检测LOX-1和TLR4mRNA的表达水平。结果在ox-LDL各剂量组(25、50、100mg／L)均可上调HUVECsLOX-1及TLR4mRNA的表达，在25—50mg／L剂量范围内呈显著的剂量—效应关系(P＜0.01)。预先分别给予LOX-1中和抗体和NF-κB抑制剂PDTC干预，LOX-1及TLR4mRNA的表达均下调。予以不同浓度氟伐他汀干预呈浓度依赖性降低ox-LDL刺激的HUVECs LOX-1及TLR4mRNA的表达。结论1．本研究证实HUVECs存在对ox-LDL具有特异性和高亲和力的受体—LOX-1，且ox-LDL可上调HUVECsLOX-1的表达。2．LOX-1／NF-κB信号激活上调HUVECsTLR4的表达，提示ox-LDL可经LOX-1受体介导活化TLR4，从而加重ox-LDL对内皮细胞的损伤，这可能是TLR4参与动脉粥样硬化发生发展机制之一。同时从受体水平将脂蛋白、炎症／免疫与动脉粥样硬化紧密联系起来。3．NF-κB在ox-LDL介导的效应中发挥关键调节作用，干预LOX-1／NF-κB信号可能成为防治动脉粥样硬化的靶目标。4．氟伐他汀可抑制ox-LDL诱导的TLR4表达上调，抑制内皮细胞炎症反应，从而发挥其独立于降脂外的抗炎抗免疫效应。第二章LOX-1／NF-κB信号途径在氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞炎症因子表达中的作用及氟伐他汀干预研究背景与目的动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症性疾病。炎症反应贯穿于血管内皮功能障碍、泡沫细胞形成、粥样斑块产生和破裂过程的各个阶段，在动脉粥样硬化的发生和发展起着极其重要的作用。已证实氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)为致动脉粥样硬化的重要物质。血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)作为血管内皮细胞膜上ox-LDL的特异性受体，它的诱导表达介导了ox-LDL的多种致AS作用。本章拟探讨LOX-1是否介导ox-LDL上调血管内皮细胞炎症细胞因子IL-6和TNF-a的表达，及氟伐他汀的干预作用，为动脉粥样硬化的防治提供新的理论依据。材料与方法培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)，予ox-LDL刺激及LOX-1中和抗体、NF-κB抑制剂PDTC和不同浓度氟伐他汀进行干预，采用ELISA检测细胞上清液中炎症细胞因子IL-6和TNF-a的表达。结果在ox-LDL各剂量组(25、50、100mg／L)均可上调HUVECs上清液中IL-6和TNF-a的表达，在25—50mg／L剂量范围内呈显著的剂量—效应关系(P＜0.01)。预先给予LOX-1中和抗体和NF-κB抑制剂PDTC干预后IL-6和TNF-a的表达减少；预先予以不同浓度氟伐他汀干预24小时呈浓度依赖性降低ox-LDL刺激的HUVECs上清液中IL-6和TNF-a的分泌。结论1．ox-LDL可刺激HUVECs上清液中炎症因子TNF-a和IL-6的表达，在25-50mg／L剂量范围内呈显著的剂量—效应关系。2．LOX-1／NF-κB信号途径活化可上调内皮炎症因子TNF-a和IL-6的表达，提示LOX-1／NF-κB信号激活参与动脉粥样硬化炎症反应，从而在动脉粥样硬化发生发展过程中起重要作用。3．氟伐他汀呈浓度依赖性抑制HUVECs上清液中炎症因子TNF-a和IL-6的表达，减弱内皮炎症反应，而发挥其独立于降脂外的抗炎效应。