【摘 要】
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目的:探讨化疗药物环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）对小鼠卵巢的损伤效应,以及在损伤过程中自噬的表达变化。方法:将40只7周龄的C57BL/6J小鼠分为:对照组（CON组）和环磷酰胺损伤组（1d组、7d组、14d组）,各组随机分配10只小鼠。将0.9%的生理盐水通过腹腔注射的方式对CON组动物进行实验,损伤组则给予腹腔注射剂量为120 mg/kg的环磷酰胺,分别于给药后第1d,第
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目的:探讨化疗药物环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）对小鼠卵巢的损伤效应,以及在损伤过程中自噬的表达变化。方法:将40只7周龄的C57BL/6J小鼠分为:对照组（CON组）和环磷酰胺损伤组（1d组、7d组、14d组）,各组随机分配10只小鼠。将0.9%的生理盐水通过腹腔注射的方式对CON组动物进行实验,损伤组则给予腹腔注射剂量为120 mg/kg的环磷酰胺,分别于给药后第1d,第7d,第14d处死小鼠。完整摘取小鼠卵巢组织并称量其重量,随后进行石蜡切片和HE染色,比较各组小鼠切片上组织的外观形态,对每一个阶段的卵泡进行识别并清点个数,采用摘除眼球的方式采集各组小鼠血液,提取血清后进行抗苗勒氏管激素（Anti-Mullerian Hormone,AMH）浓度的检测,来探究环磷酰胺对卵巢储备功能的损伤效应。此外通过免疫组织化学技术和蛋白免疫印迹来检测卵巢组织中自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达变化,以及透射电子显微镜观察卵巢组织自噬小体（Autophagosome）,来评估损伤过程中自噬的表达情况。结果:通过对小鼠体重和卵巢指数的观察发现,环磷酰胺可以使小鼠卵巢萎缩,对比CON组小鼠卵巢指数0.30±0.07mg/g·BW（Body Weight,BW）,CTX7d（0.24±0.04mg/g·BW）和CTX14d（0.23±0.04mg/g·BW）的卵巢指数都有明显下降（P值均＜0.05）,呈现递减的趋势。对进行HE染色的小鼠卵巢组织切片观察可见,CTX各组卵巢形态不规则,卵泡形态异常,通过对各阶段的卵泡进行计数统计后发现,随着时间的延长,CTX组始基卵泡数量出现递减的趋势,相反闭锁卵泡数量出现增加趋势,但其余各级卵泡计数无明显变化。相比CON组,CTX各组始基卵泡占总卵泡数比例均下降明显（P值分别为＜0.05、＜0.05及＜0.001）,相反闭锁卵泡占总卵泡数比例较CON组都有所增加,其中CTX14d组明显上升（P＜0.01）。此外CTX7d组和CTX14d组小鼠血清AMH浓度较CON组有明显升高（P值均＜0.05）,而CTX14d组较7d组有下降的趋势。通过透射电子显微镜观察卵巢组织发现,相比CON组（0.37±0.04）,CTX各组自噬小体数目均有增加的趋势,其中CTX7d组明显增多（P值＜0.01）。另外自噬标记蛋白LC3的免疫组织化学染色以及蛋白免疫印迹发现CTX组LC3的表达上调。结论:环磷酰胺诱导小鼠卵巢损伤,导致其结构和功能的破坏,在损伤过程中,小鼠卵巢发生了自噬,且自噬水平有显著提高。
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