应用RAPD技术进行落羽杉属(Taxodium Rich.)树种遗传多样性的探讨

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本研究应用随机多态性DNA技术(RAPD)对江苏省·中国科学院植物研究所保存的落羽杉属种质资源(共18种材料)进行了遗传多样性分析,得到以下结论: 1.比较了两种DNA提取方法,SDS法与CTAB法提取的DNA都可用作RAPD模板,但CTAB法提取的DNA纯度较高。 2.RAPD技术在本实验条件下的最优化体系为:1×PCR缓冲液,2.5mmol·L-1MgCl2,0.25mmol·L-1 dNTPs,24ng引物,20~40ng模板,1.2U TaqDNA聚合酶,反应总体积20μl。 反应程序为:于94℃中预变性4min;再在94℃中变性0.5min,36℃中复性1min,72℃中延伸1.5min,45个循环;最后一步72℃延伸7min。 3.对100条引物进行筛选,得到13个多态性好、重复性好的引物用来对供试材料进行分析。共扩增出DNA带92条,产物片段分子量变化范围为500~3000bp,其中75条具多态性,占总带数的81.5%,表明落羽杉属内具丰富的DNA序列多态性。 4.用RAPD方法对落羽杉属18种材料进行聚类分析,结果表明,原种落羽杉和池杉的亲缘关系较近,与墨西哥落羽杉的亲缘关系稍远;墨杉×柳杉杂交F1代与母本墨西哥落羽杉聚为一类;中山杉302与母本落羽杉更为接近;在阈值为5.0时,回交一代可以聚为3类:BCF1 149和BCF1 102各为一类,BCF1 1、27、118、140、86、136共为一类,这与形态特征调查的结果基本一致。BCF1 149可以作为速生观赏类型,BCF1 118与BCF1 102可以作为速生用材类型。
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