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目的:
子宫内膜基质细胞蜕膜化是胚胎植入和成功妊娠的必备条件,其异常会导致不育和流产等结局,除了雌孕激素的作用外,一些细胞因子也参与了此过程。mTORC2在细胞增殖、生长、分化过程中发挥着作用,Rictor蛋白作为其特异性的支架蛋白,其在蜕膜化过程中的作用尚未见报道。本研究探讨Rictor对基质细胞蜕膜化的作用及对人自然流产的影响,以期为研究自然流产打下一定基础。
方法:
1.分离和培养小鼠子宫内膜基质细胞,SiRNA沉默小鼠子宫内膜基质细胞Rictor基因,人工诱导蜕膜化。
2.选取妊娠8-10周无菌新鲜自然流产蜕膜组织标本17例作为实验研究组(早期自然流产组),同时选取同时期正常人工流产蜕膜组织标本34例作为正常对照组(正常妊娠组)。
3.免疫组织化学检测Rictor、SGK1在蜕膜组织中的表达。
4.用含蛋白酶抑制剂的蛋白质裂解液提取人子宫蜕膜组织和小鼠基质细胞中的蛋白质,采用BCA法进行组织蛋白定量,Western blotting检测Rictor、SGK1蛋白水平的表达。
5.TRIZOL法抽提子宫蜕膜组织和小鼠基质细胞中的总RNA,逆转录后Real-time PCR测定Rictor、SGK1 mRNA和基质细胞蜕膜化标志物Dtprp mRNA表达水平。
结果:
1.沉默Rictor基因后,Rictor、SGK1蛋白及mRNA表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.沉默Rictor基因后,Dtprp mRNA表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
3.免疫组织化学法发现Rictor和SGKI在早期自然流产患者和正常妊娠者的子宫蜕膜组织中均有阳性表达。与正常组相比,早期自然流产组Rictor、SGK1表达水平明显降低。
4.早期自然流产组中的Rictor、SGKI总的蛋白质表达明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05).
5.早期自然流产组中的Rictor及SGKl mRNA表达明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05).
结论:
1.沉默Rictor基因后可抑制基质细胞蜕膜化。
2.Rictor和SGKI的表达降低可能是流产发生的原因之一。
子宫内膜基质细胞蜕膜化是胚胎植入和成功妊娠的必备条件,其异常会导致不育和流产等结局,除了雌孕激素的作用外,一些细胞因子也参与了此过程。mTORC2在细胞增殖、生长、分化过程中发挥着作用,Rictor蛋白作为其特异性的支架蛋白,其在蜕膜化过程中的作用尚未见报道。本研究探讨Rictor对基质细胞蜕膜化的作用及对人自然流产的影响,以期为研究自然流产打下一定基础。
方法:
1.分离和培养小鼠子宫内膜基质细胞,SiRNA沉默小鼠子宫内膜基质细胞Rictor基因,人工诱导蜕膜化。
2.选取妊娠8-10周无菌新鲜自然流产蜕膜组织标本17例作为实验研究组(早期自然流产组),同时选取同时期正常人工流产蜕膜组织标本34例作为正常对照组(正常妊娠组)。
3.免疫组织化学检测Rictor、SGK1在蜕膜组织中的表达。
4.用含蛋白酶抑制剂的蛋白质裂解液提取人子宫蜕膜组织和小鼠基质细胞中的蛋白质,采用BCA法进行组织蛋白定量,Western blotting检测Rictor、SGK1蛋白水平的表达。
5.TRIZOL法抽提子宫蜕膜组织和小鼠基质细胞中的总RNA,逆转录后Real-time PCR测定Rictor、SGK1 mRNA和基质细胞蜕膜化标志物Dtprp mRNA表达水平。
结果:
1.沉默Rictor基因后,Rictor、SGK1蛋白及mRNA表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.沉默Rictor基因后,Dtprp mRNA表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
3.免疫组织化学法发现Rictor和SGKI在早期自然流产患者和正常妊娠者的子宫蜕膜组织中均有阳性表达。与正常组相比,早期自然流产组Rictor、SGK1表达水平明显降低。
4.早期自然流产组中的Rictor、SGKI总的蛋白质表达明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05).
5.早期自然流产组中的Rictor及SGKl mRNA表达明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05).
结论:
1.沉默Rictor基因后可抑制基质细胞蜕膜化。
2.Rictor和SGKI的表达降低可能是流产发生的原因之一。