随着现代分子生物学的发展,植物转基因技术在基因功能研究和转基因新品种培育方面具有非常重要的意义。农杆菌介导法已广泛用于植物的遗传转化,改善植物对生物和非生物胁迫的耐受能力,改善养分捕获和抗虫抗病能力,提高作物生产力并减少有害农药的使用。本研究以核桃幼胚为外植体,对从幼胚诱导体胚以及体胚成熟与萌发的条件进行了优化;采用农杆菌介导法,将JrWRKY4基因转入核桃体胚。研究核桃体细胞胚转基因体系构建的优化条件,为核桃基因功能分析和转基因育种奠定了基础。主要结果如下:1.本实验以核桃幼胚子叶为外植体,诱导体胚分化、成熟,并获得再生植株。通过体胚形成和发育过程的形态学和细胞学观察,揭示了核桃体胚发育的球形期、心形期、鱼雷形期、子叶期等过程的结构变化,明显观察到体胚的极性发育过程,与合子胚形成过程相似。观察到球形期中内层细胞分裂成基础的维管组织,鱼雷型期中原形成层已发育,清晰地看到极性的逐步建立,子叶形期中清楚的观察到Y型维管束等过程。2.农杆菌介导的核桃体细胞胚转基因体系构建:选取长势良好的未转化的核桃体细胞胚,为了能达到筛选效果,遗传转化的抗生素选择压为50mg·L^-1的卡那霉素;通过优化体胚转基因条件,农杆菌菌液浓度OD₆₀₀=0.6,侵染时间为20min,共培养1 d,抑菌剂羧苄青霉素浓度为250 mg·L^-1,将PRI101-JrWRKY4转入核桃体胚。3.经过卡那抗性筛选的体胚,用PCR检测能扩增出约1554bp的条带;对转基因体胚中JrWRKY4基因的表达量进行qRT-PCR检测,JrWRKY4基因在核桃转基因体胚中的表达量与未转化的体胚相比明显上升,转基因体胚中JrWRKY4基因的表达量是未转化体胚表达量的近10倍;对已转化的体胚进行Western Blot检测,可检测到约90KD的目的条带。