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血清I型马立克氏病病毒(Marek’s disease virus serotype 1,MDV-1)的UL49h基因与I型单纯疱疹病毒(HSV-1)UL49同源,编码病毒被膜蛋白VP22,分子量约27.6kD,是病毒被膜的主要成分。现已证实,MDV-1 VP22对病毒的复制和传播有着非常重要的作用。Dorange等发现MDV-1 VP22具有与HSV-1相似的蛋白转导功能。Hung等研究发现MDV-1 VP22能增强人16型乳头状瘤病毒(HPV-16)E7抗原融合表达的免疫效果,主要产生CD8+ T细胞介导的细胞免疫应答。本研究利用无致病性的CVI988/Rispens疫苗株扩增VP22基因,结果发现其C端缺失6个氨基酸,即201TKSERT206,对CVI988 VP22蛋白转导功能的研究结果提示:CVI988 VP22可作为一种高效便捷的蛋白转运工具,对于弥补DNA免疫缺陷和提高治疗性物质的转导效率具有非常重要的意义。1不同致病型马立克氏病病毒VP22蛋白的序列比较和分析用MDV-1 CVI988/Rispens株、GA株、RB1B株和648A株,MDV-2 Z4株和FC126株分别感染鸭胚成纤维细胞或鸡胚成纤维细胞,待出现大量空斑时,提取总DNA。根据已发表的MDV GA株VP22序列设计引物,成功扩增出MDV-1不同毒株的VP22基因。将PCR产物克隆T载体并测序分析,结果发现:强毒株GA株、超强毒RB1B株和特超强毒648A株的VP22长度保持750bp,但CVI988弱毒株的VP22基因C端缺失18bp,即存在一个6氨基酸残基的缺失性突变:201TKSERT206。2 CVI988弱毒疫苗株VP22羧基端原核表达及特异性抗体的制备设计特异性引物,扩增全长VP22、CVI988 VP22的羧基端区域(VP22C:aa94~243)、VP22末端区(VP22T:aa207~249)、缺失N端的VP22(VP22H:aa19~243)。将BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切PCR产物,克隆入pGEX-6P-1载体中,转化BL21(DE3)细菌,经IPTG诱导表达,结果发现:VP22C获得了高效可溶性表达。SDS-PAGE分离阳性条带,采用切胶免疫或用诱导后的细菌经超声波裂解的