60Co-γ、EMS及秋水仙素对朝天椒种子诱变效应的影响

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本研究选用朝天椒常规种‘中农千斤红’为试材,利用钴源(60Co-γ)、甲基磺酸乙酯(Ethyl methane sulfonate,EMS)及秋水仙素对朝天椒种子进行不同诱变方法处理,分别筛选、确定适宜诱变的半致死剂量,通过对不同处理种子催芽萌发进程、种胚动态细胞学观测,结合播后出土情形、成苗形态学、生理特性及诱变苗分子鉴定,以期获得诱变优株,丰富朝天椒种质资源和拓宽变异类型,为朝天椒遗传改良及新品种选育充实现有理论与实践。主要研究结果如下:1.对朝天椒种子进行三种诱变方法处理后,种子发芽力(发芽势、发芽率)、发芽指数和出苗率等随诱变强度的增加呈下降趋势,EMS浓度1.40%时成苗率(53.06%)>秋水仙素浓度0.03%时成苗率(50.83%)>60Co-γ辐射400Gy时成苗率(50.28%),此情形下三种诱变方法的成苗率约为对照的一半。诱变处理使植株表型性状发生突变,基于诱变强度与成苗率间线性方程关系,结合各处理幼苗生长状况,筛选出60Co-γ剂量为377.14Gy、EMS浓度为1.36%、秋水仙素浓度为0.036%是各自最适诱变剂量(半致死剂量)。2.对朝天椒种子用60Co-γ和EMS两种诱变方法处理后,在60Co-γ辐射为100Gy与EMS浓度为0.60%时发现优良变异株,相比对照植株更加健壮,叶色浓密,茎粗,叶片数与节间数多,植株长势好,生长快,随诱变剂量增加,生长势逐渐减弱,畸形率增加,苗小,叶片数与节间数逐渐变少,生长迟缓。低诱变剂量对植株的生长有一定的促进作用,而中高剂量对植株生长有抑制作用。3.对朝天椒种子进行三种诱变方法处理后,成苗叶绿素a、叶绿素b、叶绿体色素含量和类胡萝卜素等含量与诱变剂量呈负相关,叶绿素含量大于类胡萝卜素含量,叶绿素a含量大于叶绿素b含量,MDA(丙二醛)含量与相对电导度随诱变剂量的增加一直表现为上升趋势,叶片中三种保护酶(SOD、POD和CAT)活性和可溶性糖含量呈现先上升后下降的趋势,酶活性和可溶性糖含量60Co-γ辐射400Gy>秋水仙素浓度0.03%>EMS浓度1.40%,且此情形出现各诱变方法下最大值。4.对朝天椒种子进行三种诱变方法处理后,通过透射电镜观察,对照种子种胚在萌动过程中超微结构均为正常态,60Co-γ后种胚超微结构有所变化,随60Co-γ剂量的增加和辐射效应的延续,种胚超微结构受损逐渐严重,细胞萎缩,长而干瘪,细胞壁扭曲的发生率增大,线粒体膨大成圆球状,胞质膜破裂。通过光镜对叶片表皮细胞和气孔器观测发现叶片上、下表皮保卫细胞长随诱变剂量的增加先变大后减小,呈现正态分布趋势;上表皮气孔数少于下表皮气孔数,随诱变剂量增加气孔数增多。通过扫描电镜观测,叶表皮细胞多为不规则型,其次是不等细胞型,气孔呈椭圆形,基本为气孔复合体,其他表皮细胞均低于叶面气孔复合体,气孔处在张开状态。5.对三种诱变方法所获取的8个60Co-γ辐射材料、6个EMS诱变材料、5个秋水仙素诱变材料与对照植株进行SSR分子鉴定,筛选引物,PCR扩增,发现诱变材料在谱带上能与对照区分开来,基本表明诱变材料发生了DNA水平上的变异。在具有多态性引物扩增结果中,三种诱变方法扩增片段长度在50~300 bp间,多态率EMS诱变>60Co-γ诱变>秋水仙素诱变,多态率最高达100%,最低为50%;平均每对引物扩增条带数60Co-γ诱变>EMS诱变>秋水仙素诱变;谱带突变类型主要为“条带新增型”、“混合型”和“条带缺失型”。
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