甲醛与苯系物对人胚肺KMB-17细胞的联合毒作用及其作用机制

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目的:体外观察甲醛与苯系物对人胚肺二倍体细胞(KMB-17)的细胞毒性,探讨甲醛及苯系物对人胚肺二倍体细胞的联合毒性及联合毒作用类型,并探讨其毒作用机制,为制定甲醛、苯系物的室内环境卫生标准提供实验依据。方法:1.甲醛及苯系物对人胚肺二倍体细胞(KMB-17)联合毒性研究:以不同浓度毒物及其混合物对人胚肺二倍体细胞染毒,采用MTT法测各浓度组人胚肺二倍体细胞存活率,根据线性回归法求出各毒物及其混合物半数致死浓度(OLC50),以Finney法求出各毒物及其混合物预计半数致死浓度(PLC50),根据预计半数致死浓度与实际半数致死浓度的比值Q判断各毒物联合毒作用类型。2.甲醛及苯系物对人胚肺二倍体细胞的损伤及其机制研究:分溶剂对照组和甲醛及苯系物混合物损伤组(终浓度为0.1mmol/L,0.2mmol/L,0.3mmol/L,0.4mmol/L)加药后培养24h,分光光度法检测细胞培养液中SOD活力,MDA、以及细胞内GSH含量的变化。并应用SP试剂盒检测细胞核转录因子NFκB蛋白表达水平的变化;以0.3mmol/L甲醛及苯系物混合物组为研究对象,培养0h、6h、12h、24h、48h,检测上述各项指标,分析甲醛及苯系物混合物损伤人胚肺二倍体细胞的时间-效应关系。结果:1.四种化合物对人胚肺二倍体细胞的LC50分别为:甲醛:0.234×10-3mmol/ml,苯:0.079mmol/ml,甲苯:0.215mmol/ml,二甲苯:0.209mmol/ml。甲醛与苯系物混合染毒Q值在0.5到2.6之间,苯与甲苯、二甲苯混合染毒Q值小于0.5,甲苯、二甲苯混合染毒Q值大于2.6;2.甲醛及苯系物混合染毒可呈剂量依赖性和时间依赖性的致人胚肺二倍体细胞MDA增加,SOD活力减弱,GSH减少,与对照相比,其差异均有统计学意义(P<0.01);3.甲醛及苯系物组NF-κB的活力高于对照组,其改变具有剂量依赖性和时间依赖性。结论:1.四种化合物毒性大小顺序是甲醛>苯>二甲苯>甲苯,与整体动物毒性实验结果基本一致;甲醛与苯系物之间联合毒性可能呈相加作用,苯可能拮抗甲苯、二甲苯的毒性作用,甲苯、二甲苯之间可能为协同作用,四种化合物全部混合后联合毒性可能呈协同作用。2.甲醛及苯系物致人胚肺二倍体细胞损伤与细胞脂质过氧化有关。甲醛及苯系物可能通过激活NF-κB的表达,启动或调节早期反应基因的转录,加重细胞的氧化应激损伤。
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