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Family with Sequence Similarity 64, Member A (FAM64A)基因在实体肿瘤中的作用尚无报道。通过查询癌症和肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库发现,FAM64A在多种肿瘤组织中较正常组织表达上调。通过基于基因表达谱的乳腺癌患者预后在线预测网站(Gene expression-based Outcome forbreast cancer Online,GOBO)预测,FAM64A高表达的患者较低表达患者总生存率降低。由于转移是导致乳腺癌患者死亡的最重要原因,因此推测FAM64A可能与乳腺癌细胞转移相关。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指细胞失去上皮表型,向间质表型转化的一个过程。该过程以上皮细胞极性消失、细胞间连接减少等上皮特征的丢失,以及侵袭、迁移能力增强等间质特征的增加为特点。EMT可以在正常胚胎发育或某些病理情况下出现。在肿瘤转移过程中,EMT被认为是肿瘤脱离原发部位、种植于远隔组织的重要步骤,是肿瘤发生转移的重要前提。TGF-β信号通路的激活被认为在细胞发生EMT过程中起到重要作用。本研究前期研究结果证实外源加入TGF-β能上调FAM64A表达,提示FAM64A在TGF-β诱导的EMT中发挥一定作用。本文首先通过在线数据库预测FAM64A与乳腺癌预后的关系,发现FAM64A与乳腺癌的不良预后相关。通过免疫组化及实时定量PCR技术研究FAM64A表达水平与乳腺癌的相关性,发现FAM64A在乳腺癌组织中高表达。我们进一步通过体外实验研究FAM64A对乳腺癌细胞的影响。利用RNA干扰及转染过表达质粒调控FAM64A的表达,研究其对乳腺癌细胞形态、侵袭及迁移的影响,发现FAM64A可促进细胞呈现间质化细胞形态,可促进乳腺癌细胞的侵袭及迁移。通过实时定量PCR及Western Blotting技术,发现FAM64A可促进细胞EMT相关关键蛋白的变化。为进一步探索FAM64A促进细胞EMT的分子机制,我们对FAM64A与E-cadherin的关系进行研究。通过荧光素酶试验及RT-PCR发现,FAM64A可抑制CDH1基因(E-cadherin的编码基因)启动子的激活,进而抑制CDH1基因的转录。进一步通过CHIP试验发现,FAM64A可与CDH1基因结合。通过co-IP试验发现,在外源性及内源性体系中,FAM64A均可与Twist1直接结合。而干扰Twist1表达后,FAM64A无法与CDH1基因结合,并且其抑制CDH1启动子激活及表达的作用也相应降低。由于Twist1可通过与NuRD复合体结合进而结合E-cadherin的启动子区域。因此,综合以上试验证明,FAM64A可通过与Twist1结合形成复合体,结合到E-cadherin启动子上,抑制E-cadherin的表达,进而促进细胞EMT的发生。