每年春冬两季都可能会有季节性流感的发生,在世界范围内,季节性流感对人类的生命安全造成了严重的影响。而当新的流感病毒流行株出现,且人类对该流行株不具有有效抵抗力时,便会造成流感大流行。近年来,出现了许多禽流感感染人,并导致死亡的病例。这些均严重威胁着人类的生命安全。而现在普通疫苗接种和抗流感药物已不再是流感防治的唯一手段了,流感病病毒广谱中和抗体的研究为预防和治疗流感提供了新的方法。近几年,流感病毒广谱中和抗体的研究取得了一定的成就和进展。而这些成就与进展也推动了其他相关领域的发展,如广谱疫苗的发展,新的普遍保守位点的发现以及基础研究等。本次试验主要通过杂交瘤细胞技术制备了 10株流感单克隆抗体,并通过微量中和试验以及血凝抑制试验对这10株单克隆抗体进行初步鉴定。1流感单克隆抗体的制备用甲型H1N1、H3N2、H9N2和乙型流感病毒分别对小鼠进行免疫,每种病毒免疫3只小鼠。免疫三次后,用血凝抑制法分别检测血清抗体对甲型H1N1、H3N2、H9N2和乙型流感病毒的血凝抑制效价。血清抗体的血凝抑制效价大于40时,即可进行细胞融合。融合前三天对小鼠进行加强免疫,激活记忆细胞,使之成为能分泌抗体的B细胞。细胞融合后,培养4-5天,利用血凝抑制法初步筛选出阳性孔进行克隆。收集由单个克隆扩增出的杂交瘤细胞所产生的抗体上清,通过血凝抑制试验对该抗体上清进行粗筛。试验初步筛选出了 20C5、20H7、5F7、3F7、9E6、19C9、4G4、4E4、10B6和2F7等10株可能对流感病毒具有血凝抑制活性的单克隆抗体。2流感单克隆抗体的初步鉴定通过微量中和试验和血凝抑制试验对这10株单克隆抗体进行初步鉴定。利用微量中和试验初步检测这10株单克隆抗体对甲型流感病毒的H1N1和H3N2亚型以及乙型流感病毒的Yamagata系的中和活性。初步筛选出了 4株可能对这3种流感病毒同时具有中和活性的单克隆抗体。用这4株单克隆抗体进行微量中和试验检测其对H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型的甲型流感病毒以及乙型流感病毒的Yamagata系和Victoria系的中和活性。最后利用血凝抑制试验检测这3株单克隆抗体对除H7N9亚型以外的6种流感病毒的血凝抑制活性。