为了深入研究奶牛乳房炎的局部粘膜免疫情况，揭示其发生机理，需要建立一种快速而准确地测定乳汁中SIgA含量的方法。本研究分别从奶牛初乳SIgA的提纯方法、小鼠乳房炎模型的建立和双抗夹心ELISA法测定乳中SIgA，并针对这三个方面进行了方法学研究;同时对小鼠乳中SIgA的含量进行了检测。研究发现:　　 1、通过反复离心和透析等步骤对奶牛乳汁进行粗提，样品浓缩后上DEAESepharose(FastFlow)柱，用0.02mol/L(PH=8.0)至0.3mol/L(PH=8.0)PBS梯度洗脱;收集峰蛋白，并上葡聚糖凝胶-200层析柱，用0.01mol/L(PH=7.4)PBS洗脱;收集出现蛋白峰的洗脱液，经SDS-PAGE电泳鉴定，为SIgA单体。经初步测定奶牛初乳中SgA含量为3.47mg/ml。　　 2、用灭菌生理盐水配制浓度分别为105CFU/mL和1012CFU/mL的大肠杆菌O78悬液。取受孕雌鼠18只，随机分为三组:对照组、低浓度组和高浓度组。对小鼠第四对乳房分别注射0.5mL生理盐水（灭菌）和105CFU/mL的大肠杆菌混悬液以及生理盐水（灭菌）和1012CFU/mL的大肠杆菌浓混悬液。注射后观察各组小鼠48h内的临床症状，然后剖杀小鼠，取第4对乳腺制备切片，结果发现48h内高浓度组小鼠完全出现乳房炎临床症状，低浓度组症状较轻，对照组未出现任何症状。乳房炎小鼠乳腺组织切片显示，乳腺组织泡腔内有大量炎性细胞浸润，以嗜中性粒细胞（PMN）为主，小叶间导管均有不同数量的红细胞浸润。结果表明本研究成功地建立了小鼠乳房炎模型。　　 3、通过制备抗血清、特异性检验、兔抗牛酶标抗体的制备及其效价的检测，本研究确立了小鼠乳汁SIgA检测的双抗夹心ELISA方法。其具体条件为:抗体的最佳包被浓度为10μg/mL，酶标抗体最适工作浓度为1∶800.4℃过夜包被，37℃封闭2h，待检样品反应时间为45min，酶标抗体作用时间为60min，底物作用时间为15min。绘制了双抗夹心ELISA的剂量反应曲线，得出回归方程为:y=0.2271x-0.3639，R2=0.962，其中x=1g（SIgA浓度），最低检测限为4ng/mL。　　 4、采用双抗夹心ELISA方法，检测了乳房炎模型小鼠乳汁和乳腺组织中SIgA含量的变化。结果表明，乳房炎小鼠乳汁和乳腺组织中SIgA浓度都显著高于正常小鼠;随着产后时间的推移，乳汁中SIgA浓度呈现动态变化:初乳时最高，之后锐减，然后在小范围内波动。