龙葵果活性成分分离、体外抗氧化及对K562细胞增殖的抑制

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:fsb820101
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龙葵(Solanum nigrum L.),被子植物门双子叶植物纲茄科(Solanaceae)茄属(Solanum)草本植物。龙葵中含有多种活性成分,具有抗氧化、抗癌、抗炎、保肝、提高免疫力等生理活性功能。以龙葵果为原料,优化龙葵果活性成分提取纯化工艺,比较不同活性成分的抗氧化能力和对人慢性白血病K562细胞的抑制效果,在此基础上对龙葵果皂苷二次纯化工艺进行优化,并初步探究龙葵果皂苷对K562细胞的抑制机理。(1)通过单因素试验、全因子试验、爬坡试验和中心组合试验,运用响应面法优化了龙葵果活性成分的提取工艺。用80%乙醇,57.5℃,料液比1∶20.5 g/mL浸提4h,龙葵果生物碱得率(0.824±0.001)mg/g;用20%乙醇,90.6℃,料液比1∶33.5g/mL浸提2 h,龙葵果皂苷得率(8.253±0.270)mg/g;用蒸馏水,59.14℃,料液比1∶8 g/mL浸提2.15 h,龙葵果多糖得率(24.27±0.21)%。(2)通过筛选树脂及单因素试验优化了龙葵果活性成分的纯化工艺。用AB-8树脂,上样浓度0.03 mg/mL,上样pH 9,径高比1∶10,最大上样量0.60 BV,用3.0 BV pH 3的70%乙醇洗脱,控制洗脱流速2.0 BV/h,使龙葵果生物碱纯度提高9.44倍;用AB-8树脂,上样浓度0.4 mg/mL,上样pH 7,径高比1∶25,最大上样量0.63 BV,用3.0 BV pH 5的100%乙醇洗脱,控制洗脱流速2.0 BV/h,使龙葵果皂苷纯度提高2.93倍;用NKA-Ⅱ树脂,上样浓度20 mg/mL,上样pH 5,径高比1∶30,最大上样量0.54BV,用3.5 BV pH 7的60%乙醇洗脱,控制洗脱流速2.0 BV/h,使龙葵果黄酮纯度提高7.60倍;用2%木瓜蛋白酶除去龙葵粗多糖中的蛋白质,在pH 7,60℃条件下酶解2 h后,用体积比1∶3,浓度为90%的乙醇进行沉淀,龙葵果多糖纯度达到93.75%。(3)对纯化前后龙葵果各活性成分的抗氧化能力进行比较,以清除DPPH·、HO·、抑制脂质过氧化能力和总还原力作为指标,各活性成分抗氧化能力由强到弱依次为:花色苷>生物碱>黄酮>皂苷>多糖,且均呈现浓度—剂量依赖关系。(4)研究了龙葵果皂苷抗氧化能力与对人慢性白血病K562细胞抑制能力间的相关性。龙葵果皂苷对K562细胞抑制率与其抗氧化能力呈显著正相关关系,其中与清除生理性自由基—HO·能力呈极显著正相关(P<0.01)。(5)优化龙葵果皂苷二次纯化工艺。用3060目聚酰胺树脂,上样浓度0.2mg/mL,上样pH 7,径高比1∶30,最大上样量0.94 BV,依次用3.0 BV pH 6蒸馏水、20%、40%、60%乙醇梯度洗脱,洗脱流速2.0 BV/h,龙葵果皂苷纯度提高到75.99%。(6)初步探究了龙葵果皂苷对K562细胞的抑制机理。龙葵果皂苷对K562细胞有较强的抑制效果,且在低剂量下呈现剂量—效应依赖关系,龙葵果皂苷可能通过将细胞周期阻滞在G2/M期实现诱导K562细胞凋亡。
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