目的： 本实验旨在利用DC成熟过程中需吞噬肿瘤抗原或需要炎性介质的刺激及其受这些细胞所分泌的细胞因子如TNF-α刺激的原理以及其在生长发育过程中需要穿越血管内皮细胞归巢淋巴结方可成熟的原理，探索培养成熟DC的方法。同时，初步探讨T－DC培养法培养的DC与患者自身的肿瘤细胞对12种化疗药物药敏方面的相关性。此外，本实验还用重组人CEA痘苗病毒转染DC，构建DC疫苗，以求在CEA阳性肿瘤患者的生物治疗上有所突破。方法： 本实验以TNF-α预激，用含有GM-CSF及IL-4细胞因子的培养基培养T-DC；利用人脐静脉内皮细胞反向穿越单个核细胞，在含有GM-CSF、IL-4、TNF-α培养基中培养E-DC。将上述两种方法培养的DC与常规培养法所获得的DC作对照性研究，扫描电镜作形态学检测、FCM，MLR（同基因、异基因）及MTT特异性杀伤实验作生物学活性方面的测定。培养骨肉瘤患者T－DC及其自身肿瘤细胞，对两种细胞做12种化疗药物的药敏试验并进行对照。用Lipofectamine介导将重组人CEA痘苗病毒转染常规培养法培养的DC，用AS180化学发光法测转染后24h细胞上清液及细胞膜CEA抗原的表达。结果： 培养T-DC8天及培养E-DC 105h可获得具有典型形态学特征的DC，且表达CD₈₀⁺、CD₈₆⁺、CD₈₃⁺、CD_1a⁺、CD₅₄⁺、CD_11a⁺，HAC-DR⁺、与常规培养法获得的DC类似，但T-DC的表达高于其它两组。T-DC、E-DC与DC均具有较强的同、异基因MLR及对肿瘤细胞的杀伤活性。骨肉瘤患者DC与其自身肿瘤细胞对12种化疗药物药敏试验的结果类似。用痘苗病毒作载体，Lipofectamine介导可将人CEA抗原 硕士毕业论文：成熟DC培养方法的修饰优化及与肿瘤细胞化疗药物敏感试验相关性研究的DNA转染DC，在DC上获得CEA表达。靴： T—DC及E—DC均为典型、成熟的DC，具有较强的抗原提呈能力及杀瘤活性。骨肉瘤患者T—DC可代替自身瘤细胞做药敏试验，且其敏感性强于患者自身肿瘤细胞。痘苗病毒可将人CEA抗原的DNA转染DC，构建针对CEA阳性肿瘤的DC疫苗。