自从1957年,英国科学家Alick Isaacs和Jean Lindenmann发现干扰素(Interferon, IFN)以来,干扰素是目前研究最多的细胞因子。α-干扰素不仅具有抗病毒和调节免疫作用,还可以抑制肿瘤细胞增殖,一直是病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、免疫学、肿瘤学等相关领域的研究热点。本研究根据基因编码区中同义密码子的非均匀使用,编码区中碱基的构成及密码子内和密码子之间的碱基关联与基因表达水平之间的关系,利用密码子的简并性将人干扰素α-2b基因编码区进行重新设计,使之成为预期可在毕赤酵母中高效表达的外源基因。应用化学合成法,合成寡核苷酸小片段,然后组装成完整的人干扰素α-2b基因片段,并克隆在pPIC9K质粒中。经序列分析证实,合成并克隆的人干扰素α-2b基因序列与设计完全相符。同时构建了表达质粒pPIC9K-IFNα-2b,经PCR分析,证实构建正确。用电转化法转化Pichia pastoris GS115,筛选出整合型His+Mut+菌株,进一步用氨基糖甙类新霉素衍生物Geneticin(G418)筛选获得高拷贝转化子,经5d诱导表达后SDS-PAGE检测,SDS-PAGE结果显示目的蛋白已成功表达。