质型多角体病毒（Cytoplasmic polyhedrosis virus,CPV）是一种典型的双链RNA（Double stranded RNA,dsRNA）呼肠孤病毒,该病毒的基因组由10个分节段的dsRNA组成。CPV的外层衣壳仅由衣壳蛋白（Capsid shell protein,CSP）VP1组装形成,并且无囊膜包被。CPV的宿主范围非常广泛,并且对宿主细胞具有一定的选择特异性,仅在宿主的中肠上皮细胞内复制。依据这种特性,可以在宿主上皮细胞中大量繁殖CPV病毒。CPV衣壳的宿主专一性强,不感染哺乳动物和人类,具有很好的安全性。杆状病毒表达载体系统（Baculovirus expression vector system,BEVS）是目前最为重要和通用的蛋白表达生物技术平台,适合大分子量的蛋白复合物病毒样颗粒（Viral-like particle,VLP）的表达。已知含有无囊膜的单链RNA（Single stranded RNA,ssRNA）基因组的病毒和分节段的dsRNA基因组的病毒均可以作为RNA沉默的载体,所以CPV具有病毒诱导基因沉默载体的潜在能力。RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase,RdRP）和RNA干扰（RNA interference,RNAi）蛋白的病毒抑制因子可以导致病毒载体持续性和致病性的差异,使包裹的dsRNA具有了多种不同的RNAi效果（从特定基因功能的分析到害虫防治）。基于CPV衣壳蛋白CSP的VLPs可以为dsRNA的传递提供一个更安全的备选方案,而且,BEVS技术又可以为载体的生产提供一个理想的构建平台。在昆虫中,RNAi是研究抗病毒免疫防御途径的主要方法。在病毒感染过程中产生的dsRNA被Dicer酶加工成小的RNA,这些siRNA是抑制病毒基因特异性的决定因素。相比之下,在哺乳动物中,先通过模式识别受体（Pattern recognition receptors,PRRs）识别与病毒感染相关的分子（如RNA）,随后启动信号级联反应,最终产生和释放具有抗病毒功能的信号蛋白（如干扰素）。虽然RNAi被认为是诱导昆虫免疫防御机制的主要途径,但有证据表明病毒复制也会诱导免疫相关基因的转录反应。然而,关于病毒或病毒复制的成分,可以作为病原体激活分子模式（Pathogen-activated molecular patterns,PAMPs）激活昆虫先天免疫反应的假说,尚未得到系统的研究。项目主要研究了家蚕来源的Bm5细胞中,构成CPV主要衣壳蛋白VP1具激活一系列免疫相关基因的潜力,利用两种不同的VP1表达方式进行相关研究,一种是通过在细胞内源性表达VP1,另一种是通过在体外细胞培养基中添加基于VP1的病毒样颗粒（CSP-VLPs）。随后通过RT-qPCR检测经过两种不同方法处理的Bm5细胞中免疫相关基因的转录应答反应。另外,项目还研究了用CPV病毒粒子刺激Bm5细胞后免疫相关基因的转录反应。主要免疫信号通路基因转录应答反应的研究结果表明,大部分免疫相关基因对VP1或CPV病毒表现出了一定的转录应答反应,其中有2个免疫相关基因的转录反应变化显著。一是用CSP-VLPs刺激Bm5细胞24 h后,抗菌肽基因Att的表达量显著上调,说明Att对CSP-VLPs具有特殊的抵抗作用;二是作为RNAi途径的一个重要基因-Dcr2,在表达VP1的Sf21细胞中的表达水平也显著上调,但是在表达VP1的Bm5细胞中变化不显著,这表明存在物种特异性效应。然而,在后续的RNAi试验发现,Dcr2表达量的增加并没有导致沉默效率的提高,这说明Dcr2用一种特殊的方式触发了转录,而不是作为RNAi的效应因子。总之,CPV病毒的衣壳蛋白VP1具有作为PAMP的潜力,并且可以在昆虫细胞中诱导与RNAi和抗菌肽、热激蛋白等相关基因的转录反应。Ago2、Ago3等主要免疫信号通路基因表现出了相应的转录应答反应,病毒衣壳蛋白VP1或者CPV病毒作为PAMPs具有一定的活性;Att对由CPV衣壳蛋白VP1形成的VLPs具有特殊的抵抗作用,它可能反应了一种免疫途径的激活。而PRRs和可能由VP1触发的信号级联的特性有待进一步阐明,也可以为采用高通量等方法（微阵列和深度测序）进行更全面的研究提供借鉴,以便更系统地探究昆虫病毒感染出现的PAMPs,从而揭示昆虫病毒防御机制的多样性。