光果甘草植株再生体系的建立及多倍体诱导

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本文以光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)为研究对象,探讨了光果甘草愈伤组织的诱导和分化,芽增殖及生根的最佳培养条件。通过秋水仙素诱导光果甘草种子、种子苗及茎段来获得光果甘草多倍体材料。通过组织培养获得愈伤组织,利用分光光度法和HPLC法检测其中总黄酮及甘草酸含量。   以光果甘草无菌苗的胚根、下胚轴、子叶、真叶、芽及节间为外植体,分别接入含有不同激素的MS培养基上培养。经研究发现6种外植体都能诱导出愈伤组织。芽为最佳诱导愈伤组织材料,MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L为最佳诱导培养基。芽来源愈伤组织在分化培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L上培养,愈伤组织产生绿色丛生芽,分化率高达97.87%。在培养基MS+IBA 1.0mg/L中,生根率高达80%。生根苗移栽至经过灭菌处理的基质(蛭石:沙土=1:1)上,移栽28d后成活率达到95%。   以光果甘草种子、种子苗及茎段为研究材料,用秋水仙素浸种法、秋水仙素琼脂涂抹法、秋水仙素浸泡茎段法三种方法处理,诱变光果甘草多倍体。实验发现秋水仙素浸泡茎段法为最佳处理方法。将秋水仙素处理过的茎段,在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L上培养,以获取愈伤组织。利用分光光度法及HPLC法测定愈伤组织中总黄酮及甘草酸的含量。当200mg/L秋水仙素处理12h时,愈伤组织中总黄酮含量达到最高,为41.915mg/g。在愈伤组织中未检测到甘草酸。选取培养10天分裂旺盛的愈伤组织进行核型分析。在400mg/L秋水仙素处理24h时,茎段变异率最高,为38.89%。   另外,用6种光果甘草外植体在含有不同激素类型及添加物(水解乳蛋白)的培养基中诱导愈伤组织。培养28d后,获得愈伤组织,利用分光光度法及HPLC法测定愈伤组织中总黄酮及甘草酸的含量。节间为最佳处理材料。在培养基MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 1.0mg/L上培养,节间愈伤组织中总黄酮含量最高,为23.155±0.015mg/g。在培养基MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 1.0mg/L+水解乳蛋白 500mg/L培养,节间愈伤组织中总黄酮含量最高,为28.328±0.009mg/g。在愈伤组织中未检测到甘草酸。
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