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目的:通过观察EAMG大鼠胸腺髓质上皮细胞(Medullary thymic epithelial cells,mTECs)与调节性T细胞(Regulatory T-cell,Treg)相关因子的表达,以期初步阐释胸腺在重症肌无力(Myastheniagravis,MG)发病中的免疫调节机制以及益气解毒复方的干预靶点,为MG的治疗和益气解毒复方的开发研究提供理论支持和实验依据。方法:(1)健康雌性Lewis大鼠60只,6只作为佐剂对照,54只进行皮下注射免疫乳剂造模,结合Lennon评分、大鼠体重变化、低频重复电刺激结果、血清AchR-Ab含量变化综合评估自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)动物模型成功与否;并利用益气解毒复方及强的松对造模成功后的大鼠进行灌胃干预治疗。(2)Rt-qPCR、Western-Blot、免疫组化法检测胸腺组织中Treg细胞特征性标志物Foxp3、CTLA-4的基因和蛋白表达;Rt-qPCR、Western-Blot检测胸腺组织中mTECs细胞特征性标志物Aire的基因和蛋白表达。(3)ELISA和流式细胞术检测外周血中Foxp3、CTLA-4和Treg细胞相关细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β1的表达。结果:(1)动物模型评估:54只模型组大鼠中造模成功43只,成功率79.63%。(2)Rt-qPCR、Western-Blot检测结果见模型组胸腺组织Aire的蛋白及基因表达较佐剂对照组下降(P<0.01);免疫组化、Rt-qPCR、Western-Blot检测结果表明模型组胸腺组织中Foxp3的蛋白及基因表达较佐剂对照组明显下降(P<0.0001,P<0.01,P<0.0001)。免疫组化、Rt-qPCR检测结果显示模型组胸腺组织中CTLA-4的蛋白及基因表达较佐剂对照组明显下降(P<0.05,P<0.01)。(3)ELISA检测IL-10、TGF-β1结果回示:模型组IL-10含量较佐剂对照组明显升高(P<0.0001),TGF-β1含量较佐剂对照组显著降低(P<0.01);流式细胞术检测外周血中Treg细胞特征性表面因子Foxp3、CTLA-4及Treg相关细胞因子IL-4、IL-10的表达回示,模型组大鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和CTLA-4+T细胞百分比与佐剂对照组相比显著减少(P<0.01,P<0.0001);模型组大鼠IL-10+T细胞、IL-4+T细胞表达百分比与佐剂对照组相比显著升高(P<0.05,P<0.0001)。(4)益气解毒复方治疗后,Aire、Foxp3及CTLA-4的基因及蛋白表达量均较模型组有所提升(P<0.01,P<0.05);ELISA结果显示益气解毒复方治疗后IL-10含量与模型组相比显著下降(P<0.0001),TGF-β1含量较佐剂对照组无明显差异(P>0.05);流式细胞术结果显示益气解毒复方治疗后,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和CTLA-4+T细胞百分比与佐剂对照组相比无显著差异(P>0.05):IL-10+T细胞、IL-4+T细胞表达百分比经治疗后与模型组相比显著降低(P<0.0001),且综合评价各组之间的差异后,以益气解毒复方中剂量组为最佳。结论:(1)经免疫乳剂皮下注射可成功复制EAMG大鼠模型。(2)Treg细胞功能失常可能与mTECs功能改变及Aire表达量下降之间存在相关性,这可能是MG等自身免疫性疾病产生的原因,具体机制有待进一步研究发现。(3)模型组外周血中Treg细胞特征性标记物及细胞因子的变化与胸腺中的变化一致,表明MG的治疗可从胸腺着手,或可通过干预外周免疫进而达到治疗效果。(4)益气解毒复方可干预EAMG大鼠胸腺中mTECs细胞特异性因子Aire的表达,可同时干预胸腺及外周血中Treg细胞相关因子的表达。经治疗后大鼠的症状、体重、Lennon评分均有所改善,提示了益气解毒复方治疗MG的靶点可能在于促进TGF-β1、Aire等免疫调节因子的释放,调节Treg与mTECs的功能,但其具体机制有待于进一步实验证明。