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提取是中药与天然药物和天然化工产物分析与制备等领域的关键技术。目前的提取方法主要有溶剂提取法、蒸馏法、超临界萃取法等,存在提取率低、溶剂用量大、能耗大、生产成本高等缺点。本实验运用课题组开发的高效节能的柱层析提取法,进行了广藿香和金银花药用成分的柱层析提取工艺研究,并建立了金银花中绿原酸的分离制备方法。
1.广藿香药用成分的柱层析提取。以广藿香醇和广藿香酮的含量为指标,系统研究了提取溶剂、溶剂用量、浸泡时间、径高比等因素对提取率的影响,确定柱层析提取的最佳工艺为:广藿香全草粉碎过40目筛,用作提取材料;在室温下,材料用石油醚∶乙醇(8∶2)按料液比1∶3.6装入层析柱中,装柱高度为直径的10倍,静置2h使目标成分达到溶解平衡后,以2 BV/h的流速洗脱,收集10.8倍体积提取液,可将材料中的广藿香醇和广藿香酮提取完全。大量材料连续提取时,材料按料液比1∶3.6装柱后,在前后不同层析柱中循环提取三次,收集3.6倍提取液,广藿香醇和广藿香酮提取率均达96%以上。将实验同比放大100倍,实验重复性良好。与传统的水蒸气蒸馏法比较,柱层析提取法条件温和,提取成分更多,活性成分尤其是广藿香酮的提取效率更高。
2.金银花药用成分的柱层析梯度提取。分别用石油醚∶乙醇(8∶2)和50%乙醇水溶液对金银花挥发油及以绿原酸为代表的高极性成分进行梯度提取,确定的柱层析梯度提取最佳工艺为:金银花粉碎过40目筛,用作提取材料;在室温下,材料用石油醚∶乙醇(8∶2)按料液比1∶1.6装入层析柱中,装柱高度为直径的10倍,静置1h使目标成分达到溶解平衡后,依次用石油醚∶乙醇(8∶2)和50%乙醇以2 BV/h的流速洗脱,分别收集4.8倍石油醚∶乙醇和5倍50%乙醇提取液,可将材料中的挥发性成分和绿原酸提取完全。采用柱层析梯度提取法,2.5倍50%乙醇对绿原酸的提取效率是非梯度提取的1.2倍。
3.绿原酸分离纯化工艺研究。含有绿原酸的50%乙醇提取液经89%乙醇沉淀,聚酰胺吸附除杂后,进行NKA-2大孔树脂柱层析分离。预处理好的大孔树脂湿法装柱,装柱高度为直径的10倍,并用pH1.0水平衡。绿原酸浓度为1 mg/mL的上样液调节pH1.0,以1 BV/h流速上样5 BV后,先用10BV水洗杂质,再用4 BV40%乙醇洗脱绿原酸。洗脱相减压浓缩、真空干燥后得绿原酸粗品,纯度为72%。
本课题建立了广藿香和金银花药用成分柱层析提取工艺及金银花中绿原酸分离制备工艺,具有高效、节能、低成本、操作简单等优点,适用于广藿香和金银花药用成分的大量生产,对中药现代化具有重要意义。