HBV感染已成为重要的全球性公共卫生问题，预计全球1/3的人口感染过HBV。感染HBV后机体会出现不同的疾病转归，大部分可自愈，其中约5%发展为慢性感染，如慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB），肝硬化（liver cirrhosis, LC）及原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）。HBV感染的致病机理较复杂，遗传因素在HBV致病过程中起到了重要的作用，而广泛存在于基因中的基因多态性，即单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）可导致机体对各种慢性损伤的反应具有明显的个体差异，影响疾病的易感和不同的疾病转归。HLA复合体是首次发现的与疾病有明确关系的遗传系统，2011年7月，一项来自日本的全基因组关联研究（genome-wide association study，GWAS）发现，HLA-DQ基因的SNP位点rs2856718与CHB有关，尚未见在中国人群中的相关报道，故将此位点纳入本研究；Vinod Kumar等，报道了一项GWAS研究结果，HLA-DQ基因的SNP位点rs9275572与丙型肝炎病毒相关性肝癌有关，该位点是否与HBV感染同样具有相关性，在中国人群中是否存在这种关联，是否与抗病毒药物治疗预后相关，尚未见相关报道，故将此位点纳入本研究。2010年8月，Hongxing Zhang等报道了一项中国人群的GWAS研究结果，位于人类染色体1p36.22的KIF1B基因的rs17401966位点与HBV相关肝癌有关，该位点是否在HBV感染不同结局及药物治疗预后中同样存在相关性，故将该位点纳入本次研究。此外，本室的前期研究发现了与HBV感染结局相关的差异蛋白-真核肽链释放因子GTP结合亚单位（eRF3b），它是由GSPT2基因编码，它与eRF3a（由GSPT1编码，与eRF3b高度相似，87%的氨基酸序列相同）共同参与中止真核生物蛋白合成的过程。前期，我们进行了关于这两种蛋白与HBV感染的功能学研究，本研究将探讨GSPT1和GSPT2基因的两个SNP位点（rs33635和rs974285）与HBV感染及治疗预后的相关性。第一部分HLA-DQ、GSPT及KIF1B基因多态性与HBV感染不同结局的关联研究目的：探讨HLA-DQ （rs28567185和rs9275572）、GSPT（rs33635和rs974285）及KIF1B（rs17401966）五个SNP位点与HBV易感性、HBV自然清除及HBV相关疾病进展的关联。方法：选择符合条件的研究对象1649例，根据研究目的，分成不同亚组，分别研究5个SNP位点与HBV易感性（HBV感染组和健康组）、HBV自然清除（HBV感染组和HBV自然清除组）、LC进展（LC组和CHB组）、HCC进展（HCC组和LC+CHB组）的关联。以问卷形式收集研究对象的一般情况，并收集外周血，提取DNA，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix Assisted Laser Desorption/ionization Time ofFlight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS）实验平台进行DNA的SNPs分型。先进行单因素分析，再用非条件Logistic回归分析校正混杂因素，分析SNP位点与HBV易感性及其感染结局的关联，并用多因子降维法分析基因-基因及基因-环境的交互作用，由SPSS16.0统计软件、MDR2.0及MDRPT V0.4.6完成数据分析。结果：1HLA-DQ多态性位点rs2856718与HBV感染及其结局的关系在共显性模型下，携带rs2856718AG和rs2856718GG基因型的个体感染HBV的风险降低，OR值分别为0.738和0.459（95%CI=0.571-0.954,P=0.020；95%CI=0.331-0.636, P＜0.001）；在显性模型（GG+AG vs AA）和隐性模型（GG vs AA+AG）下，OR值分别为0.641和0.541（95%CI=0.505-0.814, P＜0.001；95%CI=0.403-0.725, P＜0.001）；吸烟和饮酒均为HBV感染的独立危险因素（OR=1.688, P=0.006；OR=1.507,P=0.001）；rs2856718与HBV自然清除相关，在共显性模型下，rs2856718与HBV自然清除有关联，携带rs2856718AG和rs2856718GG基因型的个体HBV自然清除能力强（AG vs AA, OR=0.642,95%CI=0.479-0.773,P=0.003; GG vs AA, OR=0.528,95%CI=0.361-0.773, P=0.001）；在显性模型下，rs2856718GG+AG基因型携带者HBV自然清除能力更强，发展为HBV慢性感染的可能性为rs2856718AA基因型携带者的0.610倍（95%CI=0.463-0.805, P＜0.001）；在隐性模型下，rs2856718GG基因型携带者HBV自然清除能力强，发展为HBV慢性感染的可能性为rs2856718AA+AG基因型携带者的0.688倍（95%CI=0.492-0.962,P=0.029）；吸烟为HBV感染的独立危险因素（OR=1.512,95%CI=1.009-2.264, P=0.045）。2HLA-DQ多态性位点rs9275572与HBV感染及其结局的关系rs9275572与HBV易感性有关联。在共显性模型下，携带rs9275572AG或rs9275572AA基因型的个体感染HBV的风险降低，OR值分别为0.706和0.374（95%CI=0.553-0.903, P=0.006；95%CI=0.244-0.573, P＜0.001）；在显性模型（AA+AG vs GG）下和隐性模型（AA vs GG+AG）下，OR值分别为0.627和0.429（95%CI=0.498-0.790, P＜0.001；95%CI=0.283-0.650, P＜0.001），吸烟和饮酒均为HBV感染的独立危险因素（OR=1.635, P=0.002; OR=1.582, P=0.002）。rs9275572与HBV的自然清除相关，在共显性模型下，携带rs9275572AG基因型的个体HBV自然清除率更高，发展为HBV慢性感染的可能性为rs9275572GG基因型携带者的0.719倍（95%CI=0.544-0.949, P=0.020）；在显性模型下，携带rs9275572AA+AG基因型的个体HBV自然清除率更高，发展为HBV慢性感染的可能性为rs9275572GG基因型携带者的为0.714（95%CI=0.547-0.932, P=0.013）；吸烟是HBV自然清除的独立危险因素（OR=1.527,95%CI=1.022-2.282, P=0.039）。3GSPT多态性位点rs33635和rs974285与HBV感染及其结局的关系本研究尚未发现rs33635和rs974285两个SNP位点与HBV易感性、HBV自然清除及LC进展和HCC进展的相关性。4KIF1B多态性位点rs17401966与HBV感染及其结局的关系本研究发现rs17401966基因多态性与HBV自然清除有关联，携带rs17401966GG基因型的个体HBV自然清除的可能性更高，发展为HBV慢性感染的可能性为rs17401966AA基因型携带者的0.568倍（95%CI=0.361-0.894, P=0.015）；rs17401966基因多态性与HBV易感性、LC进展及HCC进展无关联。5基因-基因交互作用经MDR分析，在HBV易感性研究中，最佳因子模型为HLA-DQ位点（rs2856718、 rs9275572）、 GSPT1位点（rs33635）和KIF1B位点（rs174019664）之间的交互作用（P=0.0010），高危组合易感风险为低危组合的2.643倍（95%CI=1.458-3.487）。在HBV自然清除研究中，最佳因子模型为HLA-DQ位点（rs2856718、rs9275572）、GSPT1位点（rs33635）和KIF1B位点（rs174019664）之间的交互作用（P=0.023），与HBV自然清除的关联强度为2.024（95%CI=1.156-3.958）。在LC进展和HCC进展研究中均未发现基因-基因间的交互作用。6基因-环境交互作用经MDR分析，在HBV易感性研究中，准确性和交叉检验一致性最高的因子模型为HLA-DQ位点（rs9275572）、吸烟和饮酒的交互作用（P=0.0010），高危组合易感风险为低危组合的3.014倍（95%CI=1.647-4.963）。在HBV自然清除研究中，最佳因子模型为HLA-DQ位点（rs2856718）和饮酒的交互作用模型（P=0.0010），与HBV自然清除的关联强度为1.923（95%CI=1.185-4.032）。在LC进展研究中，未发现有统计学意义的基因-环境交互作用模型。在HCC进展研究中，最佳因子模型为HLA-DQ位点（rs2856718）、GSPT1位点（rs33635）、KIF1B位点（rs17401966）和吸烟间的交互作用（P=0.0110），高危组合易感风险为低危组合的1.847倍（95%CI=1.265-3.468）。结论：1在中国北方汉族人群中，HLA-DQ的两个SNP位点（rs9275572和rs2856718）与HBV的易感性，HBV自然清除及HBV感染后的相关疾病进展有关。rs9275572A和rs2856718G为HBV感染的保护性因素，在HBV自然清除、LC进展和HCC的进展中起到保护作用。2KIF1B rs17401966基因多态性与HBV自然清除有关联，携带rs17401966GG基因型的个体HBV自然清除的可能性更高，与HBV易感性、LC进展及HCC进展无关联。3本研究未发现GAPT1rs33635和GAPT2rs974285两个SNP位点与HBV易感性、HBV自然清除及LC和HCC进展的相关性。4吸烟和饮酒均为HBV感染、HBV自然清除的独立危险因素；年龄越大，越容易由CHB进展到LC和HCC；男性、高龄及饮酒为HCC进展的独立危险因素；在HBV易感性、HBV自然清除及HBV感染不同结局中，存在基因-基因和基因-环境的交互作用。第二部分HLA-DQ、GSPT及KIF1B基因多态性与拉米夫定治疗预后的关联研究目的：本研究拟探讨HLA-DQ （rs28567185和rs9275572）、GSPT（rs33635和rs974285）及KIF1B（rs17401966）五个候选基因与LAM治疗后不同结局的相关性。方法：选择符合条件的研究对象354例，以问卷形式收集研究对象的一般情况，并收集外周血，提取DNA，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix Assisted Laser Desorption/ionization Time of Flight MassSpectrometry，MALDI-TOF MS）实验平台进行DNA的SNPs分型。经LAM治疗6个月后，根据病毒学应答（DNA载量＜3log copies/ml或下降＞2log copies/ml）与否分为两组（DNA应答组与DNA非应答组），根据生化学应答（治疗后ALT在正常参考值范围）分为ALT应答组和ALT非应答组。先进行单因素分析，再用非条件Logistic回归分析校正混杂因素，分析SNP位点与HBV易感性及其感染结局的关联，并用多因子降维法进行基因-基因和基因-环境之间的交互作用分析，由SPSS16.0统计软件、MDR2.0及MDRPT V0.4.6完成数据分析。结果：1HLA-DQ多态性位点rs2856718与DNA应答及ALT应答的关系rs2856718与DNA应答无关联，但与ALT应答具有相关性，rs2856718A等位基因更容易出ALT应答，在共显性模型下（GG vs AA），OR值为2.458（95%CI=1.277-4.730，P=0.007）；在显性模型（GG+AG vs AA）和隐性模型（GG vs AA+AG）下，OR值分别为1.691（95%CI=1.093-2.615，P=0.018）和2.040（95%CI=1.104-3.772，P=0.020）；性别是ALT应答的独立影响因素，男性ALT应答率低于女性，年龄、吸烟及饮酒与ALT应答无关联。2HLA-DQ多态性位点rs9275572与DNA应答及ALT应答的关系rs9275572与DNA应答相关，rs9275572G等位基因更容易出DNA应答，共显性模型（AG vs GG: OR=2.062,95%CI=1.153-3.687，P=0.015; AAvs GG: OR=5.553,95%CI=1.827-16.877，P=0.003）、在显性模型下（AA+AG vs GG: OR=2.599,95%CI=1.525-4.428，P＜0.001）和隐性模型下（AAvs GG+AG: OR=4.684,95%CI=1.552-14.133，P=0.006）均具有相关性；男性患者拉米夫定治疗后DNA应答的可能性较女性低。rs9275572基因多态性与ALT应答具有相关性，rs9275572G等位基因更容易出ALT应答，在共显性模型下（AG vs GG: OR=2.037,95%CI=1.231-3.369, P=0.006; AA vs GG: OR=3.245,95%CI=1.415-7.440,P=0.005）、在显性模型下（AA+AG vs GG: OR=2.279,95%CI=1.442-3.602,P＜0.001）和隐性模型下（AA vs GG+AG:OR=2.678,95%CI=1.182-6.068,P=0.018）均存在此关联；性别与ALT应答相关，男性LAM治疗后的ALT应答的可能性低于女性（OR=0.509,95%CI=0.297-0.872,P=0.014），年龄、吸烟和饮酒与ALT应答均无相关性。3GSPT1多态性位点rs33635与DNA应答及ALT应答的关系rs33635C等位基因携带者更易发生DNA应答，在共显性模型下（CCvs TT），rs33635CC基因型携带者DNA应答的可能性为rs33635TT基因型携带者的2.449倍（95%CI=1.057-5.674, P=0.037）；在隐性模型下（CCvs TT+CT），rs33635CC基因型携带者DNA应答的可能性为rs33635TT+CT基因型携带者的2.551倍（95%CI=1.138-5.716, P=0.023）；性别为DNA应答的独立影响因素，男性DNA应答的可能性降低。在共显性模型（CC vs TT）和隐性模型下（CC vs TT+TC），rs33635C等位基因携带者更易发生ALT应答（OR=3.587,95%CI=1.727-7.450,P=0.001; OR=3.840,95%CI=1.910-7.720, P＜0.001）；性别与ALT应答相关，男性患者ALT应答的可能性均降低。4GSPT2多态性位点rs974285与DNA应答及ALT应答的关系尚未发现GSPT2多态性位点rs974285与DNA应答及ALT应答的相关性。5KIF1B多态性位点rs17401966与DNA应答及ALT应答的关系rs17401966与DNA应答具有相关性，rs17401966G等位基因携带者更易发生DNA应答，在共显性模型下（AG vs AA），OR值为3.141（95%CI=1.826-5.403, P＜0.001），在显性模型下（GG+AG vsAA）， OR值为3.483（95%CI=2.045-5.932, P＜0.001）；在隐性模型下（GG vsAA+AG），OR值为5.350（95%CI=1.176-24.347, P=0.030）；性别、年龄为DNA应答的独立影响因素，吸烟和饮酒对DNA应答无影响。rs17401966G等位基因携带者更易发生ALT应答，在共显性模型（AGvs AA）和显性模型（GG+AG vs AA）下，rs17401966与ALT应答具有相关性（OR=1.941,95%CI=1.231-3.063, P=0.004; OR=1.687,95%CI=1.089-2.615, P=0.019）；性别是ALT应答的独立影响因素，年龄、吸烟及饮酒对ALT应答均无影响。结论：1HLA-DQ多态性位点rs2856718与DNA应答无关联，与ALT应答具有相关性，rs2856718G等位基因可能为ALT应答的保护性碱基。性别是DNA应答和ALT应答的独立影响因素，女性更容易出现DNA应答和ALT应答。2HLA-DQ多态性位点rs9275572与DNA应答及ALT应答有关，rs9275572A等位基因携带者DNA应答和ALT应答的可能性增高，性别和年龄为DNA应答的独立影响因素，性别为ALT应答的独立影响因素。3GSPT1rs33635C等位基因是DNA应答和ALT应答的保护性因素，女性DNA应答和ALT应答的可能性更高。4尚未发现GSPT2多态性位点rs974285与DNA应答及ALT应答的关联。5KIF1B rs17401966G等位基因为DNA应答和ALT应答的保护性碱基，性别和年龄为DNA应答的独立影响因素，性别为ALT应答的独立影响因素。6经MDR分析，LAM治疗后的DNA应答和ALT应答不仅受到遗传因素的影响，同时又受到环境因素的影响，并存在基因-基因和基因-环境之间的复杂的交互作用。第三部分HLA-DP基因多态性与HBV感染的Meta分析目的：采用Meta分析的方法，对国内外不同人群的研究结果进行综合评价，以证实HLA-DP基因的rs3077和rs9277535两个SNP位点是否与HBV感染及HBV自然清除有关。方法：以“rs3077”为检索词，检索中国生物医学文献数据库、中国学术期刊全文数据库及Pubmed数据库。共检索到7篇文献，以“rs9277535”为检索词，共检索到8篇文献，经过仔细阅读，共8篇文献纳入meta分析，其中，有两篇文献分别包括4个阶段的研究数据，共获得16个亚组数据，有12个亚组数据用于rs3077位点的meta分析，14个亚组数据用于rs9277535位点的meta分析。提取纳入文献的信息如下：第一作者、出版年、研究设计类型、受试者来自的国家和种族、病例组和对照组的定义和数量、提取DNA和分型的方法。文献未提供等位基因频率的，利用相应的基因型计算，分别提取rs3077和rs9277535位点的相关数据，本研究对rs3077和rs9277535位点的等位基因、共显性模型、显性模型及隐性模型进行了meta分析。计算优势比（OR）及其95%CI作为效应量。首先对纳入分析的原始文献进行Q检验，分析异质性，根据异质性检验结果，选择固定效应模型或随机效应模型求其效应合并值。用漏斗图和Egger’s检验进行发表偏倚分析，以P<0.05为差异有统计学意义。所有数据用STATA10.0分析。结果：1HLA-DPA1rs3077与HBV感染及HBV自然清除的关系经meta分析，结果表明，携带HLA-DPA1rs3077A等位基因为HBV感染的保护性因素（OR=0.556，95%CI=0.527-0.586, P＜0.001），携带HLA-DPA1rs3077A等位基因的个体感染HBV的风险降低，为携带HLA-DPA1rs3077G等位基因个体的0.556倍；在共显性模型、显性模型及隐性模型中结果相同（AGvsGG, OR=0.522，95%CI=0.485-0.561, P＜0.001；AAvsGG, OR=0.350，95%CI=0.311-0.393, P＜0.001；GA+AAvsGG,OR=0.478，95%CI=0.446-0.513, P＜0.001；AAvsGA+GG, OR=0.480，95%CI=0.429-0.536, P＜0.001）。携带HLA-DPA1rs3077A等位基因的个体感染HBV后自然清除的可能性高，发展成CHB的可能性降低（OR=0.654，95%CI=0.611–0.701, P＜0.001），为携带HLA-DPA1rs3077G等位基因个体的0.654倍；在共显性模型、显性模型及隐性模型中结果相同（AGvsGG, OR=0.636，95%CI=0.577-0.702, P＜0.001；AAvsGG,OR=0.446，95%CI=0.383-0.520, P＜0.001；GA+AAvsGG, OR=0.595，95%CI=0.542-0.652, P＜0.001； AAvsGA+GG, OR=0.565，95%CI=0.489-0.652, P＜0.001）。2HLA-DPB1rs9277535与HBV感染及HBV自然清除的关系meta分析结果表明，携带HLA-DPA1rs9277535A等位基因为HBV感染的保护性因素（OR=0.582，95%CI=0.556-0.609, P＜0.001），携带HLA-DPB1rs9277535A等位基因的个体感染HBV的风险降低，为携带HLA-DPB1rs9277535G等位基因个体的0.556倍；在共显性模型、显性模型及隐性模型中结果相同（AGvsGG, OR=0.542，95%CI=0.506-0.579, P＜0.00；AAvsGG, OR=0.371，95%CI=0.336-0.409, P＜0.00；GA+AAvsGG,OR=0.493，95%CI=0.462-0.525, P＜0.001；AAvsGA+GG, OR=0.516，95%CI=0.472-0.564, P＜0.001）。携带HLA-DPB1rs9277535A等位基因的个体HBV自然清除的可能性高，发展成CHB的可能性降低（OR=0.663，95%CI=0.626-0.702, P＜0.001），为携带HLA-DPB1rs9277535G等位基因个体的0.663倍；在共显性模型、显性模型及隐性模型中结果相同（AGvsGG,OR=0.623，95%CI=0.570-0.681, P＜0.001；AAvsGG, OR=0.464，95%CI=0.412-0.523, P＜0.001；GA+AAvsGG, OR=0.577，95%CI=0.531-0.628,P＜0.001；AAvsGA+GG,OR=0.430，95%CI=0.390-0.474, P＜0.001）。结论：1通过meta分析证实，携带HLA-DPA1rs3077A等位基因是HBV感染的保护性因素，携带此等位基因的个体感染HBV的风险降低，为携带rs3077G个体的0.556倍；而且还证明HLA-DPA1rs3077A等位基因为HBV自然清除的保护性因素，携带该等位基因的个体HBV自然清除的可能性更高。2通过meta分析证实，HLA-DPA1rs9277535A等位基因也是HBV感染和HBV自然清除的保护性因素，携带该等位基因的个体感染HBV的风险降低，为携带HLA-DPB1rs9277535G等位基因个体的0.556倍；携带HLA-DPB1rs9277535A等位基因的个体HBV自然清除的可能性更高，发展成CHB的可能性降低。