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目的:研究在不同的剂量下,雌激素对兔背部皮瓣的组织损伤、皮瓣血供及皮瓣存活面积的影响,并探讨其可能的作用机制及效应变化规律,为临床应用开拓新的思路及提供理论基础。
方法:选3~4月龄新西兰大耳白兔30只,雌雄不限,随机分为A、B、O三组,每组10只。以3%戊巴比妥钠经耳缘静脉注射进行麻醉。于兔背部做蒂在近端,以兔背中线为轴线的超长型皮瓣一个,大小3cm×12cm。皮瓣两侧相对缝合,制成管状,蒂部无明显旋转或压迫,远端原位缝合。供区创面直接缝合。术后第2、4、6天于皮瓣蒂部注射雌激素(苯甲酸雌二醇注射液),A组应用剂量为100ug/kg体重,B组应用剂量为50 ug/kg体重,O组为对照组,不予注射。于术后第4、7天,在皮瓣近侧部位取少量组织作组织切片,光镜下观察,计数中性粒细胞个数,并采用免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)。术后第5天,于皮瓣近侧部位采血,用放射免疫法检测皮瓣血清丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量。于术后第7天皮瓣断蒂,用硫酸纸描绘、计算机分析法测量皮瓣存活面积。
结果:
1、大体观察:由于麻醉的原因各组均有1只动物死亡(由于满足统计需要,未予补全),麻醉过后各组动物健康成活,皮瓣均未出现感染现象,各组皮瓣远侧部位自术后第三天起,开始出现面积不同的坏死区域。
2、皮瓣存活面积:
(1)、A组皮瓣存活面积较O组皮瓣存活面积增加35.47%,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.018),可以认为组间存在显著性差异;B组皮瓣存活面积较O组皮瓣存活面积增加26.48%,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.015),可以认为组问存在显著性差异;A组与B组皮瓣存活面积比较,差别不存在统计学意义(P=0.823)。
(2)、以性别作为分组因素,对雌、雄不同性别的存活面积之间进行统计分析, P=0.705,P>0.05,表明雌雄不同性别的皮瓣存活面积之间不存在显著性差异。
3、皮瓣血清丙二醛(MDA)含量测定结果:A组MDA较O组MDA降低,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.028),可以认为组间存在显著性差异;B组MDA较O组MDA降低,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.023),可以认为组间存在显著性差异; A组与B组MDA含量之间,差别不存在统计学意义(P=0.927)。
4、皮瓣血清一氧化氮(NO)含量测定结果:A组NO较O组NO增高,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.02),可以认为组间存在显著性差异; B组NO较O组NO增高,差别存在统计学意义(P=0.025),经统计学检验,可以认为组间存在显著性差异;A组与B组NO含量之间,差别不存在统计学意义(P=0.917)。
5、皮瓣VEGF(血管内皮生长因子)表达结果:A组比O组VEGF表达增强,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.02),可以认为组间存在显著性差异;B组比O组VEGF表达增强,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.01),可以认为组间存在显著性差异;A组与B组VEGF表达之间,差别不存在统计学意义(P=0.718)。
6、皮瓣组织中性粒细胞计数(NEU)结果:A组NEU较O组NEU降低,经统计学检验,差别存在统计学意义(P=0.001),可以认为组间存在显著性差异; B组NEU较O组NEU降低,差别存在统计学意义(P=0.01),经统计学检验,可以认为组间存在显著性差异; A组与B组NEU之间,差别不存在统计学意义(P=0.393)。
7、直线相关分析:
(1)、皮瓣存活面积S与血管内皮生长因子VE6F表达之间相关系数r=0.697,表明二者之间呈正相关,P=0.002,存在统计学意义。
(2)、皮瓣存活面积S与血清NO含量之间相关系数r=0.755,表明二者之间呈正相关,P=0.001,存在统计学意义。
(3)、皮瓣存活面积S与血清丙二醛MDA含量之间相关系数r=-0.414,表明二者之间相关关系成立,为负相关,P=0.032,存在统计学意义。(4)、皮瓣存活面积S与皮瓣中性粒细胞计数NEU计数之间相关系数r=-0.579,表明二者之间相关关系成立,为负相关,P=0.002,存在统计学意义。
结论:
1、雌激素注射处理可使皮瓣VEGF表达上调,VEGF表达上调则可促进皮瓣新生血管生成,有利于皮瓣血供重建。
2、雌激素注射处理可使皮瓣NO含量增加,可使皮瓣血管扩张,增加血流量。
3、雌激素注射处理可使皮瓣MDA降低,使皮瓣中性粒细胞NEU浸润减少,表明雌激素可以减轻皮瓣组织损伤以及缺血再灌注损伤。
4、应用雌激素于皮瓣蒂部注射可增加皮瓣的存活面积。其机制可能为雌激素通过促使内皮细胞释放NO和促进VEGF表达上调等途径,促进皮瓣新生血管生成,使皮瓣血管舒张,增加血流量。而且,雌激素也可能通过减轻皮瓣再灌注损伤而增加皮瓣存活面积。
5、应用雌激素注射处理有可能成为一种新的有效的促进皮瓣成活的途径。