各种原因引起的表皮缺乏性疾病是临床常见的治疗比较棘手的病种。烧伤，创伤及各种肿瘤手术后的表皮缺失，眼表角膜缘干细胞缺乏相关的疾病，如酸碱化学烧伤、热烧伤、先天性无虹膜、Stevens—Johnson综合征、瘢痕类天疱疮等自身免疫性疾病，都会导致表皮的组织缺失。对于这些疾病目前人们还没找到一种最令人满意的治疗方法。自体或者同种异体表皮移植因为其排斥率低已经成为治疗首选。然而治疗依赖的体表重建又面临供体组织移植后免疫排斥，供体来源短缺等问题。所以，体外培养的组织工程治疗性研究成为许多学者关注的热点。 干细胞是一种具有复制能力和多向分化潜能的细胞。在组织工程的细胞学基础中，干细胞无疑是最好的体外扩增“种子”细胞。但干细胞在体外培养条件下很容易分化而失去增殖功能，至今仍然没有一个公认的实际有效的组织工程化培养体系。 理想的体外培养体系要满足两个条件，一是要在体外保持干细胞的高增殖能力，以便扩增更多的细胞用于移植。二是要能较长时间保持干细胞的特性，为体外培养和移植创造条件。P38MAPK信号通路是细胞内的一类稳定蛋白，研究表明其参与多种干细胞的分化过程，SB203580是P38MAPK信号通路的特异性阻断剂。 我们研究阻断剂SB203580对结膜上皮干细胞和皮肤上皮干细胞体外扩增的影响。发现培养基中加入10μMSB203580阻断剂后，体外组织块培养法培养的结膜上皮片更光滑，细胞更紧密，边缘整齐，以单层细胞为主。而对照组的结膜上皮片细胞疏松，组织块边缘不规则，以复层细胞为主。为观察扩增细胞中的干细胞含量，我们对扩增细胞进行了克隆化培养。结果显示阻断组扩增的表皮细胞能形成更多克隆集落，克隆生成率增加。证明扩增的细胞中有更多的干细胞或前体细胞。阻断组的组织块生长指标更好。培养的组织块加入阻断剂后，组织块中上皮干细胞标志物ABCG2，P63，K15及高增殖标志K16和K14表达增加。证明组织块加入阻断剂后，经过体外培养上皮干细胞仍能保持较好的干细胞特性和高增殖水平。 在结膜上皮干细胞和皮肤上皮干细胞的体外克隆化培养中，加入10μMSB203580阻断剂后，干细胞的初次出现时间提前2天，克隆生成率是对照组的3倍。上皮克隆内的细胞更小更紧密，核浆比增加；细胞倍增时间更短，更多细胞表达增殖标志物Ki67；流式细胞学分析更多细胞位于S期。证明相比普通培养液，加入10μMSB203580后，其结膜上皮干细胞和皮肤上皮干细胞确实能保持更高的增殖能力。免疫组织化学染色显示，阻断组克隆内的表皮细胞表达更多的干细胞标志物如：P63、ABCG2、K15，Realtime—PCR显示其核酸表达水平也增加。而结膜上皮细胞和皮肤上皮细胞分化标志物K19和K10表达下降。 研究首次表明，在体外培养扩增中，加入P38MAPK信号通路阻断剂SB203580能保持结膜上皮干细胞和皮肤上皮干细胞的增殖能力，同时降低其分化水平。是体外培养和扩增的有效添加剂。P38MAPK信号通路参与调控表皮干细胞的体外扩增。