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单纯疱疹病毒1型(HSV-1)是疱疹病毒家族中的一员,它主要通过感染口唇,神经组织,以及皮肤(非生殖器)来侵入人体,正常情况下潜伏于体内。当机体免疫力下降,月经期间或情绪低落时有可能引起体内潜伏的疱疹病毒的激活。本实验室前期发现从余甘子枝叶中所提取的五没食子酰基葡萄糖酸(Pentagalloylglucose,PGG)在抑制HSV-1方面有良好的效果。 实验目的:研究药物PGG对单纯疱疹病毒I型在宿主细胞内核转运及出核过程的影响,寻找对抗疱疹病毒株的新型药物。 实验方法:采用MTT检测药物毒性,空斑实验检测PGG对于HSV-1及几种ACV-耐药株的空斑抑制率及半数抑制浓度。 共聚焦观察PGG能否影响HSV-1核转运。RT-PCR检测加药后即刻早期基因ICP0,ICP4和UL54表达量的变化。通过RT-PCR和western-blot检测PGG抑制病毒核转运过程是否与HSP90、tubulin或Dynein有关。 检测上清液中病毒的TCID50,间接推断加药对病毒出核有无影响。构建携带病毒基因UL31和UL34的融合表达载体pEFGP-NI-UL31和pEFGP-NI-UL34。转染重组质粒进入细胞,加药后观察两个基因的定位与表达量是否受到PGG的影响。进一步通过RT-PCR和western-blot检测其表达量。利用空斑实验检测病毒感染出核时期加药,再通过转染使UL31或UL34过表达,能否减轻PGG对病毒出核的抑制作用。 实验结论:(1)PGG对临床疱疹病毒耐药株有抑制作用(2)PGG会影响HSV-1在宿主细胞内核转运的过程,此过程与微管,热休克蛋白无关,可能是以动力蛋白dynein为靶点下调其表达来实现的。(3)PGG影响HSV-1在宿主细胞内出核的过程,是通过改变病毒基因UL31和UL34在宿主细胞内的表达和UL34蛋白的定位来实现的。