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端粒是染色体末端由重复DNA序列和相关蛋白组成的一种特殊结构,具有稳定染色体结构及完整性的功能,会随染色体复制与细胞分裂而缩短。端粒酶是一种核糖核蛋白,能以自身RNA模板合成端粒DNA,催化合成TTAGGG重复序列,添加到染色体末端,维持端粒长度不变。端粒酶主要由hTR,TEP1和hTERT组成,一般认为hTERT是端粒酶激活的限速因素。大多数永生化细胞和恶性肿瘤细胞具有端粒酶活性,因而端粒酶目前已成为为细胞持续分裂提供遗传基础的原因。由于端粒酶与细胞衰老、肿瘤发生等关系如此密切,因此已成为肿瘤放射治疗研究热点。
目的:
本文利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavy Ion Research Facilityin Lanzhou,HIRFL)产生的碳离子(31MeV/u12C6+)对人体细胞、癌细胞进行不同剂量的辐照,探索细胞中端粒酶活性的变化及与之相关的生物学信息。材料与方法:
以人肝细胞HL—7702,肝癌细胞SMMC—7721为实验对象,用不同剂量1Gy、2Gy、3Gy、4Gy的重离子分别对两种细胞进行照射,用多聚酶链式反应。银染端粒重复序列扩增法(PCR-telomeric repeat amplification protocol,TRAP-PCR)检测不同剂量下细胞端粒酶活性的变化。并提取不同剂量下的细胞转入培养皿中,培养10天,固定,染色。统计大于50个细胞的克隆数,绘制细胞存活曲线。
结果与讨论:
结果显示,人肝细胞HL-7702自身没有端粒酶活性,经1Gy辐照后也没有端粒酶活性,在2、3Gy处出现端粒酶活性,4Gy处端粒酶活性又消失。肝癌细胞SMMC-7721在1-3Gy处随着剂量的增大端粒酶活性升高,在4Gy处又开始下降;在1—3Gy处随着时间的推移端粒酶活性随着时间而加强(p<0.05)。随着剂量的增大,细胞存活率呈剂量依赖型下降。分析得知,重离子辐射可以诱导人肝细胞产生端粒酶活性,也可以改变肝癌细胞的端粒酶活性。端粒酶参与细胞受辐照后DNA单链损伤的修复;辐照后DNA双链断裂导致端粒酶活性减弱。本实验与其他低LET射线相比,使重离子在辐照治疗中的优势得以体现。