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目的:口蹄疫病毒在感染宿主细胞过程中,能诱导天然免疫应答产生。有文献报道口蹄疫病毒的非结构蛋白(L和3C)对天然免疫系统激活有直接阻断作用,但对结构蛋白VP0在抑制天然免疫反应中的作用机制尚不明确。本实验拟研究口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP0对Ⅰ型干扰素信号通路的影响。方法:通过反转录PCR构建VP0真核表达载体,利用western blot验证VP0蛋白转染HEK-293T细胞后的表达情况;Real-time PCR检测VP0蛋白与PVR蛋白分别对FMDV在BHK细胞上复制的影响,检测VP0蛋白与PVR蛋白分别对SeV诱导的干扰素信号通路分子RIG-I、IRF3、IFN-β及下游刺激基因ISG15、ISG20表达的影响;双荧光素酶报告基因检测系统检测VP0蛋白与PVR蛋白分别对SeV诱导的IFN-β和NF-κB启动子激活以及对RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)信号通路分子激活IFN启动子的影响;免疫共沉淀检测VP0蛋白、PVR蛋白分别与RLRs信号通路中关键分子的相互作用;间接免疫荧光检测VP0蛋白、PVR蛋白分别与关键分子IRF3在细胞中的定位。结果:成功构建了pCAGGs-VP0真核表达载体,可以在HEK-293T细胞中表达;FMDV感染4-6h后,VP0蛋白显著促进FMDV在BHK细胞上的复制(P<0.01或P<0.05),PVR蛋白可明显抑制FMDV的复制(P<0.01或P<0.05);VP0蛋白明显抑制干扰素下游刺激基因的表达(P<0.01或P<0.05),PVR蛋白对干扰素下游刺激基因的表达有促进作用(P<0.01或P<0.05)。在双荧光素酶报告基因检测实验中,VP0蛋白抑制SeV诱导IFN-β和NF-κB的活化有剂量依赖性(P<0.01或P<0.05),并对RIG-I、MDA5、VISA、TBK1和IRF3介导的IFN-β产生具有抑制作用(P<0.05),但对IRF7没有明显影响;PVR蛋白可促进SeV介导的IFN-β和NF-κB的活化(P<0.01或P<0.05),并对RIG-I、MDA5、VISA、TBK1和IRF3介导的IFN-β产生有促进作用(P<0.05),但对IRF7没有明显影响。免疫共沉淀显示VP0蛋白和PVR蛋白都可与IRF3发生相互作用;间接免疫荧光验证了VP0蛋白、PVR蛋白分别与IRF3在细胞中的共定位。结论:通过荧光定量PCR及双荧光素酶报告基因检测法证明了VP0蛋白可以显著抑制IFN-β和NF-κB的活化,而PVR蛋白可显著促进IFN-β和NF-κB的活化,从而推测FMDV结构蛋白VP0对Ⅰ型干扰素信号通路有抑制作用,PVR蛋白对Ⅰ型干扰素信号通路有促进作用。免疫共沉淀及激光共聚焦实验进一步证明了VP0蛋白和PVR蛋白可以分别通过与IRF3相互作用来抑制和促进Ⅰ型干扰素信号通路的激活,而VP0蛋白与PVR蛋白也可发生相互作用,据此可以认为这三种蛋白可能形成复合物,从而影响天然免疫系统。