特发性血小板减少性紫癜患儿血小板蛋白质组学的研究

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:q398197371
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目的:特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种免疫介导的血小板减少综合征,是儿童最为常见的出血性疾病。目前对ITP的诊断依然是“排除诊断法”,临床上诊断主要靠外周血小板减少但其无特异性;抗血小板抗体测定对诊断ITP的意义基本上是负性的;骨髓检查创伤性大,患儿及其家属不易接受,因此需寻求一种能为ITP的患儿的临床病情早期诊断,预后估计,制定个体性的治疗方案提供依据的诊断方法。用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorPTIon/IonIzaTIon—TIme of flIghT—mass sPecTromeTry,SELDI— TOF— MS)技术结合蛋白芯片检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)(治疗前)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)(治疗后)非免疫性血小板减少症(NITP)和正常对照组血小板蛋白质谱的差异性表达,筛选可用于特发性血小板减小性紫癜早期诊断及病情变化监测及判断预后的血小板蛋白质标志物,建立ITP诊断模型,并用ROC曲线判断其灵敏度和特异度,在血小板蛋白质组水平创立特发性血小板减小性紫癜的分子诊断新方法。方法:应用SELDI-TOF-MS检测结合在蛋白质芯片上的血小板蛋白质,获得30例ITP治疗前,30例ITP治疗后,30例NITP和40例正常对照者的血小板蛋白表达指纹图谱,并用BIomarker WIzard和BIomarkerPaTerns SysTem5。0软件对数据进行分析,建立人工神经网络诊断模型,并用ROC曲线判断其灵敏度和特异度。结果:在分子质量/电荷比值(质荷比,mass elecTron raTIo,M/Z)为2000-20000范围内, ITP治疗前组与正常对照组之间有显著差异(P<0.01)的蛋白质峰有27个,其中高表达的蛋白质峰有2个,低表达的蛋白质峰有25个,从分析的结果看最有意义的蛋白质是差异最显著及P值最小(为O)的蛋白质有四种,质荷比分别为3130.18、2281.72、7672.06、5170.65的蛋白质。这些蛋白可能为ITP的生物标记物,其中M/Z是2281.72的蛋白未发现对应蛋白质,可能为新的蛋白质,余三种蛋白可能为β-防卫素110、50S核糖体蛋白质L34和60S核糖体蛋白L41。ITP治疗前组与 ITP治疗后组有显著差异(P<0.01)的蛋白质峰有25个,均为低表达,其中有5个蛋白亦包含在ITP治疗前与正常对照组中.从分析的结果看最有意义的蛋白质是差异最显著及P值最小(为O)的蛋白质是质荷比为2574.16、6218.23、3126.14、4718.90的蛋白质。其中M/Z是6218的蛋白未发现对应蛋白质,可能为新的蛋白质,余三种蛋白可能为尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂、多肽菌素-C和细胞色素 b559β亚基.它们可以看成是 ITP的血小板标志物。ITP治疗后与正常对照组之间有显著差异(P<0.01)的蛋白质峰有10个,其中高表达的蛋白质峰有3个,低表达的蛋白质峰有7个;其中有2个蛋白亦包含于ITP治疗前组与ITP治疗后组,从分析的结果看最有意义的蛋白质是差异最显著及P值最小(为 O)的蛋白质是质荷比为2350.85、3549.49、2572.70、4451.54、2205.75的蛋白质。其中M/Z是2350的蛋白未发现对应蛋白质,可能为新的蛋白质,余蛋白质可能为芋螺毒素ArMSGL-0123、毒鱼豆素-1、UrocorTIn-2和前脑啡肽-A.它们可能是其ITP的血小板生物标志物;ITP治疗前组与NITP组之间有显著差异(P<0.01)的蛋白质峰有22个,均为低表达的蛋白质峰;从分析的结果看最有意义的蛋白质是差异最显著及P值最小(为O)的蛋白质是质荷比为2281.72、2854.65、3813.62、4061.78的蛋白质。其中M/Z是2281的蛋白未发现对应蛋白质,可能为新的蛋白质。余蛋白质可能为天冬氨酸1-脱羧酶β链、β内啡肽和磷脂酰丝氨酸脱羧酶α链。它们亦可能为ITP的血小板生物标志物;质荷比为3130.18、2281.72、7672.06、5170.65的蛋白质组合的诊断模型绘制出的R O C曲线,其面积为0.968,最佳阈值为0.3807,灵敏度1.000,特异度0.825,Youden指数最大(0.82).讨论:SELDI蛋白质芯片技术有能筛选出敏感性高、特异性强的血小板蛋白,筛选出的差异蛋白可能是特发性血小板减少性紫癜早期诊断及病情变化监测及判断预后的血小板蛋白质标志物。
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