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草菇(Volvariella volvacea)起源于中国,迄今已有300多年的栽培历史。草菇是典型的热带高温型食用菌,菌丝对低温的抵抗力差,对环境条件的变化尤其是温度的变化很敏感。与大多数食用菌相比,草菇存在着冷害,即在4℃的低温条件下保存,菌丝会发生自溶而导致菌种死亡和子实体发软、液化直至腐烂。这给草菇的菌种保存和产后保鲜带来了极大的困难。对草菇低温自溶现象的探索已成为一个重要的研究热点,在分子水平上已经有了一些研究工作。本文从蛋白这一角度出发,通过对草菇进行低温处理后蛋白表达的变化来分离纯化和鉴定与其相关的低温诱导蛋白。主要研究结果如下: 1.运用硫酸铵和聚丙烯酰胺制备电泳相结合的技术,进行了草菇低温诱导蛋白的分离纯化,蛋白纯度达到氨基酸测序的要求(大于95%)。 2.经硫酸铵分级沉淀后,采用聚丙烯酰胺制备电泳技术,以未经低温处理的草菇菌丝体蛋白样品为对照,分离、纯化得到了三种新的草菇低温诱导蛋白,分别命名为CspDZG1、CspDZG2、CspDZG3。 3.等电聚焦电泳方法分析了三种蛋白的等电点,分别为:3.7,4.4和4.4。 4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,CspDZG1、CspDZG2由一条多肽组成,分子量分别为56KD,54.5KD;CspDZG3由两个亚基组成,分子量分别为54.5KD,68KD。 5.经S. aureus V8蛋白酶酶解后,分别测定了N端氨基酸序列。 本研究中,通过对草菇可溶性蛋白组分的分析,发现草菇在低温胁迫下有新的可溶性蛋白质产生。说明草菇在低温刺激下,产生了特异的低温诱导应答的产物,即低温诱导蛋白。这一结果与陈明杰等在低温条件下草菇有新的mRNA出现的研究结果是相适应的。