【摘 要】
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目的 通过对APC基因突变的人大肠癌组织与APC基因无突变的人大肠癌组织及癌旁正常粘膜组织的双向凝胶电泳(2-DE)及MALDI-TOF-MS质谱分析,寻找APC阳性患者与APC阴性患者的蛋白
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目的 通过对APC基因突变的人大肠癌组织与APC基因无突变的人大肠癌组织及癌旁正常粘膜组织的双向凝胶电泳(2-DE)及MALDI-TOF-MS质谱分析,寻找APC阳性患者与APC阴性患者的蛋白质表达差异点,以及二者与周围正常粘膜组织的蛋白质表达差异点,旨在为探索大肠癌的发生机制和具体过程提供启示和有益帮助。 方法 取散发性人大肠癌手术后新鲜标本,术后立即保存,经病理证实后,利用PCR-SSCP法检测是否存在APC基因的突变。将APC基因突变组、未突变组及正常粘膜3组样品经解冻、均浆、水化后等电聚胶、平衡、双向凝胶电泳,采用银染法染色和透射扫描,凝胶图像用PD-quest 7.3软件分析后选取差异点蛋白,酶解后经MALDI-TOF-MS质谱分析获得肽指纹图,最后在数据库中搜索和蛋白质鉴定。 结果 经PCR-SSCP检测在31例人大肠癌标本中,有14例(45.2%)癌组织中存在着APC基因MCR区段的基因突变。在14例中选取6例高分化腺癌标本和另外APC基因无突变组中选取6例高分化腺癌标本及对应的12例周围正常粘膜组织,行双向凝胶电泳,所得图像大部分效果满意,蛋白质点数为590-980之间,大多数分布于30-100kd、pH3.5-9区域,PD-quest 7.3软件分析正常粘膜组平均检测蛋白质点873±62个,APC基因突变组癌组织平均检出蛋白质814±56个,APC基因正常组癌组织平均检出蛋白质793±48个。三者之间的合成凝胶两两比较,匹配率分别为81.4%、86.3%、
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