肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率都有明显升高的趋势,肺癌是一种多因素的疾病,吸烟是引起肺癌的主要因素之一。目前肺癌的治疗主要以手术治疗、化学治疗和放射治疗为主,但存活率普遍不高,所以,我们仍需寻求一种新的方法来治疗肺癌。研究表明,灭活的仙台病毒(Hemaglutinating virus of Japan Envelope, HVJ-E)不仅可以作为载体传递抗肿瘤药物,激活多重抗肿瘤免疫,同时还能直接杀伤肿瘤。在本研究中,我们发现HVJ-E可直接诱导人肺腺癌细胞(A549)、耐顺铂人肺腺癌细胞(A549/DDP)死亡,并初步探讨其抗肿瘤机制。首先,我们通过实验观察HVJ-E作用A549、A549/DDP细胞后,RIG-I和IFN-P的表达情况。Western Blot和ELISA检测显示,经HVJ-E刺激后,RIG-I的表达量增加,诱导IFN-β的产生,并呈剂量-效应关系。这表明HVJ-E与A549、A549/DDP细胞发生了融合,断裂的病毒基因组被RIG-I识别,从而导致A549、A549/DDP细胞中的IFN-β含量随HVJ-E浓度的增加而增加。其次,我们探索HVJ-E对A549、A549/DDP细胞繁殖和生长的影响。用HVJ-E处理A549、A549/DDP细胞,倒置显微镜下观察,发现两种细胞均出现生长停滞、皱缩和破裂的现象,同时用Hoechst33258染色试剂盒可以观察到细胞染色质皱缩,细胞核碎裂。CCK-8检测结果显示,用100～800 MOI HVJ-E分别处理A549、A549/DDP细胞24小时后,细胞的活力与对照组相比明显下降,并呈剂量依赖关系。流式细胞术FACS法检测显示,经HVJ-E处理后,A549、A549/DDP细胞均产生明显的凋亡,且呈剂量依赖关系。由此可以说明HVJ-E可以直接导致A549、A549/DDP细胞凋亡。然后,我们用、Vestern Blot法检测p53、Bcl-2/Bax、Caspase信号通路的相关蛋白。p53的表达量随HVJ-E浓度增加有升高趋势,Bcl-2/Bax却呈下降趋势,caspase-8、caspase-9、 caspase-3、PARP、Caspase-8、Caspase-9随HVJ-E浓度升高而活性升高,最终都可检测到碎裂的形式。为进一步确认HVJ-E诱导的A549、A549/DDP细胞凋亡是否与Caspase通路有关,我们用caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK分别预处理细胞后加HVJ-E处理,结果显示,碎裂的caspase-3和PARP被显著抑制且细胞凋亡率也被显著抑制。该实验证明Caspase信号通路参与HVJ-E诱导的A549、A549/DDP细胞凋亡。接着,我们研究了MAPK通路是否参与HVJ-E诱导的A549、A549/DDP细胞凋亡。Western Blot法检测p-p38、p-JNK、p-ERK1/2结果p38、JNK、ERK1/2均被激活。为进一步确认MAPK通路对细胞凋亡的影响,我们分别利用p38抑制剂SB203580 (10μM)、 JNK抑制剂SP600125 (A549:8μM、A549/DDP：10μM)、ERK抑制剂PD98059(20μM)预处理细胞30分钟后再加HVJ-E, Western Blot结果显示p38、JNK、ERK1/2磷酸化均被明显抑制,同时用CCK-8测定的细胞活力显示,SB203580、SP600125、PD98059均可以提高细胞活力。以上结果表面MAPK通路在HVJ-E诱导的A549、A549/DDP细胞凋亡中发挥作用。最后,我们研究了自噬在HVJ-E引起A549、A549/DDP细胞死亡中的作用,我们利用GFP-LC3质粒和Lipofectamine2000转染A549、A549/DDP细胞,分别设阴性对照组、800 MOIHVJ-E、Rapa组,24小时后倒置荧光显微镜下观察自噬现象。结果显示,Rapa组出现大量自噬小体,HVJ-E处理组出现少量自噬小体。再用Western Blot法检测自噬相关蛋白的表达情况,结果显示p-mTOR、p-p70S6K的表达量均随着HVJ-E浓度的增加而减小。由此说明白噬参与了HVJ-E促进细胞的死亡。再利用Rapa和CQ分别预刺激A549、 A549/DDP细胞,Western Blot法检测可发现A549细胞,与HVJ-E组对照组相比,CQ组cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达量明显升高,Rapa组降低,而A549/DDP细胞的结果正好相反。CCK-8测定每组细胞的活力,结果显示,A549细胞,CQ组的细胞死亡率最高；A549/DDP细胞,Rapa组的细胞死亡率最高。以上结果显示,对于A549细胞,抑制自噬可以促进HVJ-E引起的细胞凋亡,而对于A549/DDP细胞,激活自噬可以促进HVJ-E引起的细胞凋亡。