人Ⅰ型精氨酸酶的固定化及其制备L-鸟氨酸的方法研究

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L-鸟氨酸(L-Orn)存在于多种生物体细胞中,是尿素循环的中间产物,它能排出体内多余的氨态氮,提高人体免疫力,保肝护肝,去除多余脂肪。在保健、医药等领域起着不可替代的作用。本文利用酶法转化生产L-鸟氨酸,该方法是基于精氨酸酶可将L-精氨酸(L-Arg)水解生成L-鸟氨酸与尿素。固定化酶技术是指用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内,酶仍能实行其专属的催化反应,并且可回收和重复利用的一类技术。本研究以实验室筛选保藏的人来源的Ⅰ型精氨酸酶酵母重组菌株发酵分泌表达精氨酸酶Ⅰ(ARGⅠ)。选用壳聚糖为固定化载体,戊二醛为交联剂,交联固定化ARGⅠ。研究比较固定化ARG Ⅰ与游离ARG Ⅰ的酶学性质发现:固定化酶与游离酶的最适温度及最适pH相同,两者的最适温度为40℃,最适pH=10,但固定化酶的热稳定性和pH耐受性较游离酶有了明显的提升。同时实验证实,固定化酶还可以进行多次重复反应,在经过36批次重复使用后,仍然能保持约50%的活性,这对于大规模工业化生产是极为有利的。之后,本研究以固定化ARGⅠ转化制备L-鸟氨酸,并探索其最优转化条件,得出以下结论:在1%的戊二醛交联浓度,40℃,pH10,1mMMn2+,L-Arg的浓度为200g/L时,可得到149.2 g/L的L-Orn,其摩尔转化率约为98%。
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