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稻瘟病菌[Magnaporthe grisea]附着胞是稻瘟病菌在侵入水稻组织前形成的一种侵染结构,是稻瘟病菌侵染过程中的一个关键环节。了解稻瘟病菌附着胞阶段基因表达的状况对于弄清附着胞形成、发育和侵入机制具有重要的意义。本论文第一部分研究了形成24小时的稻瘟病菌附着胞基因表达及与菌丝、孢子基因表达的差异,为寻找参与稻瘟病菌附着胞形成、发育过程或穿透过程的关键基因打下了基础。球毛壳菌[Chaetomium globosum]和绿色木霉[Trichoderma viride]都是重要的生防真菌,几丁质酶和葡聚糖酶等分泌性酶类被认为在木霉等真菌的生防过程起重要作用,而关于毛壳菌生防过程中细胞壁降解酶的作用还缺少研究。本论文第二部分试图利用从绿色木霉基因组DNA中克隆到的内切几丁质酶基因(chbi),转入球毛壳菌CG12菌株中,研究其表达状况,探讨几丁质酶在提高毛壳菌生防中的可能作用。 主要研究结果如下: 1、本论文借助SMART技术和长距离PCR技术构建了水稻稻瘟病菌成熟附着胞(发育24小时)的cDNAλ噬菌体文库。cDNA文库的滴度为2.37×10~6,插入片段平均大小为660bp。随机挑选的12个克隆经测序,获得9条平均长度为470bp的EST序列,contig组装为8条非冗余EST序列。这8条EST在NCBI上用blastn进行相似性联配,发现有2条EST序列在GenBank中没有登记过。本cDNA文库基本反映了24小时阶段稻瘟病菌附着胞的基因表达状态,适合用于研究稻瘟病菌附着胞阶段基因的功能分析。 2、本论文利用SSH技术构建了稻瘟病菌发育24小时附着胞与稻瘟病菌菌丝/孢子cDNA之间的差减文库(附着胞cDNA差减文库)。重组质粒经测序获得250条EST序列。这些EST经contig组装后,得到155条非冗余EST序列。155条非冗余EST序列在Magnaporthe grisea Database用blast进行相似性联配,并逐个比较分析EST序列对应的基因组DNA序列,确定这155条EST