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目的：探讨OK-432肿瘤疫苗对DBA/2荷瘤小鼠外周血和脾脏NK细胞的免疫效应。方法：1.采用DMBA启动、巴豆油促癌的小鼠皮肤乳头状瘤形成的经典2阶段致癌方法，构建DMBA/巴豆油小鼠荷瘤模型。2.培养KLN-205细胞，以GA为交联剂，使与OK-432产生交联，去除剩余物制成OK-432肿瘤疫苗。3.随机把DBA/2荷瘤小鼠分为空白对照组，OK-432组和OK-432肿瘤疫苗组三组，每组16只。各组小鼠右侧腹腔分别注射100ul的PBS液，0.7KE/100ul的OK-432，5×105个/100ul的OK-432肿瘤疫苗，每周注射1次，连续3周。4.疫苗注射后第1、3、7，14天眼球采血，利用流式细胞术（FCM）检测外周血中NK细胞的含量。5.疫苗注射后第3天取血完成后，无菌制取脾脏分离淋巴细胞，乳酸脱氢酶法（LDH）检测不同效靶比下NK细胞的杀伤活性。6.切取小鼠皮肤涂药部位瘤体，组织病理HE染色切片观察。7.实验数据应用SPSS16.0软件进行分析，所有结果采用x±S表示，方差齐性检验后，用单因素方差分析，两组间采用SNK法检验。检验水准P<0.05,差别有统计学意义。结果：1. DBA/2小鼠成瘤情况诱瘤18周后，75只DBA/2小鼠成瘤57只，未成瘤10只，死亡8只，成瘤率为76%。2.小鼠外周血中NK细胞含量变化情况末次疫苗注射后第1天，三组小鼠外周血NK细胞含量均有升高，两两比较均有统计学意义。注射后第3天，三组小鼠外周血NK细胞含量达最高值，其中OK-432组与OK-432肿瘤疫苗组两组NK细胞含量较空白对照组有明显差异，而OK-432组较OK-432肿瘤疫苗组差异不大，无统计学意义。注射后第7天，三组NK细胞含量逐渐下降，OK-432肿瘤疫苗组较空白对照组NK细胞含量有统计学意义，其余无明显差异。到14天时，三组NK细胞含量下降到较低水平。不同时间内，空白对照组NK细胞含量总体呈下降趋势。3.小鼠脾脏NK细胞杀伤活性效靶比为25:1时，三组中脾脏NK细胞杀伤活性无明显差异。效靶比为50:1，100:1时，三组小鼠的脾脏NK细胞杀伤活性明显增高，且OK-432肿瘤疫苗组较OK-432组升高快。4.显微镜下观察瘤体病理组织切片与正常组织明显不同，肉眼上此癌呈菜花状，镜下可见原位癌，异型增生的细胞占据上皮全层，细胞呈明显的异型性，并见较多的核分裂象，间质淋巴细胞浸润；部分已发展为浸润癌，鳞状癌细胞突破基底膜浸润到间质中。结论：1.采用DMBA启动、巴豆油促鳞癌的方法可行，成瘤率高。2.OK-432肿瘤疫苗能有效提高荷瘤小鼠外周血NK细胞含量。3.OK-432肿瘤疫苗治疗后的小鼠脾脏NK细胞杀伤活性明显增高。4.OK-432肿瘤疫苗能提高小鼠固有免疫能力，有效增强宿主抗肿瘤效应，其作用机制有待于进一步研究。