SD大鼠神经干细胞分离培养、分化及鉴定

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传统观念认为成年哺乳动物中枢神经系统不具备再生能力,这意味着成年动物脑和脊髓内的神经细胞只能因损伤、疾病及自然凋亡等因素逐渐减少,而不能被更新或替代。神经干细胞的发现打破了这一传统观念,十几年来的研究发现:成年哺乳动物中枢神经系统的特定部位存在神经干细胞,在体外通过无血清培养,在细胞营养因子的作用下能够增殖,形成神经球并可以连续传代扩增,在血清等因子诱导下能够分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。神经干细胞在体内平时处于相对静止状态,在脑损伤等刺激因素作用下能够增殖、迁移、并分化为神经元或神经胶质细胞,起到相应的生物学效应。缺血性脑损伤严重影响人类健康,造成沉重的社会负担,是临床医生以及基础研究工作者面临的严峻课题,神经干细胞移植治疗缺血性脑疾病前景广阔。目的:从新生Sprague-Dawley(SD)大鼠海马分离神经干细胞并进行培养、诱导分化及鉴定。方法:分离出生24小时内SD大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用细胞免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果:从新生大鼠海马分离的细胞呈巢蛋白免疫阳性并能在体外传代培养和连续形成克隆;血清诱导分化后的细胞可分别表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的特异性抗原。结论:分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物巢蛋白,并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能,说明新生大鼠海马存在神经干细胞,并可进一步用于亚低温—神经干细胞移植治疗缺血性脑疾病的研究。
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