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高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测技术以其高效、高速和高灵敏度等特征,成为一种优异的分离分析方法,其与各种检测器的联用已被广泛应用于生物工程、食品工业、环境检测等领域。本文以冬虫夏草保健品和鱼肉为检测对象,主要研究内容包括四个方面:(1)HPLC-PDA法测定冬虫夏草中的多糖肽目的:建立一种直接测定冬虫夏草多糖肽的HPLC-PDA法。方法:采用HPLC-PDA和水提醇沉法,以Atlantis T3柱(4.6×250mm,5μm)为色谱柱,柱温35℃,流动相为体积分数为5%的甲醇水溶液,流速为1.0m L/min,进样量为10μL,扫描波长为190nm—460nm。结果:平均回收率为96.4%,RSD为0.78%,测得样品中多糖肽含量为16.8 mg/g。结论:该方法简单、快速、准确,回收率较高,为测定冬虫夏草保健品中多糖肽提供了可靠方法。(2)HPLC-PDA法同时测定冬虫夏草中腺苷和虫草素目的:建立一种同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素含量的HPLC-PDA法。方法:用HPLC-PDA法检测,腺苷和虫草素用流动相超声提取,以UltimateTM AQ-C18柱(4.6×250mm,5?m)为色谱柱,柱温30℃,流动相为甲醇:0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液=10:90(V/V),流速为1.0ml/min,进样量为20μL,检测波长为260 nm。结果:腺苷、虫草素线性范围为1.0~100.0μg/m L,平均回收率分别为99.4%(RSD为0.48%)、97.8%(RSD为3.85%),测得样品中腺苷、虫草素含量分别为2.236 mg/g、0.101 mg/g。结论:流动相配比简单,回收率高,能够实现对冬虫夏草及其保健品中腺苷和虫草素两种主要核苷类活性成分的同时快速准确测定。(3)HPLC-ESI-MS法同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素和虫草酸目的:建立一种同时测定冬虫夏草中的腺苷、虫草素和虫草酸的HPLC-ESI-MS法。方法:采用HPLC-MS联用法、选择性离子检测(SIM)和电喷雾离子化(ESI),腺苷、虫草素和虫草酸用纯水超声提取,Thermo Bio Basic-18 PIONEER(150 mm×2.1 mm,5μm)为色谱柱,柱温为30℃,流动相为0.05 mol/L甲酸-甲醇(94:6)(V/V),流速为0.2m L/min,进样量为5μL。结果:腺苷、虫草素和虫草酸的线性范围分别是10~50μg/m L、10~50μg/m L、100~500μg/m L,平均回收率分别为96.56%(RSD为2.75%)、96.27%(RSD为2.60%),97.45%(RSD为2.34%),检测限分别为0.16μg/m L、0.23μg/m L、7.3μg/m L,测得样品中腺苷、虫草素和虫草酸的平均含量为0.74mg/g、0.22mg/g、5.1mg/g。结论:该方法简单而快速,可用于虫草保健品的质量控制和混伪品的便捷鉴别。(4)HPLC-AFS法测定鱼肉中甲基汞目的:建立测定鱼肉中甲基汞(Me Hg)含量的高效液相色谱-原子荧光光谱联用法(HPLC-AFS)。方法:采用HPLC-AFS检测,色谱柱为C18反相色谱柱(150×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈(5.0%,V/V)+乙酸铵(0.462%,m/V)+半胱氨酸(0.12%,m/V),流速为1.0m L/min,进样量为100μL,原子荧光光谱条件为总电流30m A、负高压270V、载气流速600m L/min、屏蔽气流速1000m L/min。结果:方法的加标回收率在94.3%~101.4%之间,RSD(n=6)在2.24%~4.70%之间;当样品称样量为0.5g时,甲基汞检出限为0.003 mg/kg,定量限为0.006 mg/kg。结论:方法重现性好、回收率高,可用于包括水产品(鱼肉)甲基汞含量分析。本文的主要贡献在于:①提出了测定冬虫夏草中多糖肽的HPLC检测技术,方法简单、快速、准确,回收率较高,尚未见文献报道;②提出了同时测定冬虫夏草中的腺苷、虫草素两种活性成分,或腺苷、虫草素和虫草酸三种活性成分的HPLC检测技术,并做了实验条件的优化摸索,取得了良好的实验效果;③提出了测定鱼肉中甲基汞的HPLC检测技术,并通过本地市场采集的鱼肉样品实验验证,方法简单、便捷,检测效果良好。