目的:胃癌（gastric cancer,GC）是我国最为常见的消化道恶性肿瘤之一,其特点是侵袭性强且易转移。尤其是出现肝转移后,患者的生存期很短。因此GC严重威胁着人类的健康,造成了极大的疾病负担。近年来生物技术的发展,推动了分子诊断和治疗的进步,有助于改善恶性肿瘤的不良预后。外泌体是一类可由大多数细胞分泌的直径约为100 nm的细胞外囊泡,其中含有多种反映细胞起源和介导细胞间通讯的生物活性分子,是肿瘤液体活检的理想样本和新的治疗载体。环状RNA（Circular RNAs,CircRNAs）是一类在真核生物中广泛表达的共价闭合的RNA,参与机体多种生理和病理过程,并且可以被有效富集到外泌体中。随着RNA深度测序技术的发展和算法的改进,研究发现外泌体CircRNAs（exosomal circRNAs,exo-circRNAs）参与了肿瘤发生发展的重要过程,但其中调控机制尚不完全清楚。课题组前期利用RNA-seq方法建立胃癌相关CircRNAs表达谱,发现胃癌患者体内circCD2AP呈现高表达状态。但circCD2AP在外泌体中的表达及其在胃癌中的作用和相关机制的尚不清楚,需要进一步探索。方法:1.胃癌肝转移circRNAs筛选:选择3对胃癌伴肝转移患者的癌组织及其癌旁配对正常组织,采用RNA-seq方法检测circRNAs表达情况,选择高表达的circCD2AP进行进一步研究。2.circCD2AP临床意义研究:用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）法检测150对胃癌及其癌旁配对正常组织中circCD2AP表达水平,分析circCD2AP与胃癌患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、幽门螺杆菌（HP）感染、CEA水平等临床参数的相关性。3.采集20例胃癌患者和20名健康对照者的血清,使用超速离心法从中提取外泌体并用qRT-PCR法检测其中circCD2AP表达水平。4.采用qRT-PCR法分别检测正常胃GES-1细胞株及常见胃癌细胞株中circCD2AP表达情况,根据结果选择了MKN45及HGC27作为后续细胞研究对象。从MKN45和HGC27细胞培养液中分离外泌体,qRT-PCR法检测分离所得的外泌体中circCD2AP表达情况。5.通过功能获得和功能缺失实验,观察circCD2AP对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并利用裸鼠模型观察circCD2AP下调对体内肝转移的影响。6.在机理研究方面,综合采用细胞核质分离试验、荧光原位杂交（FISH）、RNA免疫共沉淀（RIP）、生物信息学分析、Western blot（WB）、双荧光素酶报告基因系统、RNA pull down、质谱分析等方法研究circCD2AP调控胃癌肝转移发生发展的分子机制。结果:1.circCD2AP在胃癌组织中表达升高,且与胃癌肿瘤浸润深度（P=0.028）、淋巴结转移（P=0.013）、肝转移（P=0.004）、TNM分期（P=0.005）密切相关。胃癌血清外泌体中circCD2AP表达水平也上调,且胃癌切除后血清外泌体circCD2AP水平明显下降,与手术前比较差异有统计学意义（P＜0.05）。2.circCD2AP过表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,而下调circCD2AP则显示出相反的作用。circCD2AP上调的外泌体能促进共培养胃癌细胞的增殖和侵袭能力。裸鼠模型体内实验表明,下调circCD2AP抑制了胃癌肝转移。3.从机制上讲,circCD2AP一方面通过海绵miR-595增加ZFP91的表达,另一方面circCD2AP直接与HNRNPA2B1蛋白相互作用,促进胃癌肝转移的发生发展。结论:1.circCD2AP可能是胃癌肝转移的重要分子标志物之一。2.circCD2AP通过miR-595/ZFP91途径及与HNRNPA2B1蛋白相互作用,促进胃癌肝转移的发生发展。