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流行病学调查显示卡介苗接种可以减少变应性疾病的发生。动物实验验证了完整的卡介苗(bacille calmete-guerin,BCG)对哮喘气道炎症和气道高反应性具有抑制作用,本所前期研究亦证明了早期低剂量的BCG组分核酸(DNA)和多糖(polysaccharide,PSA)均能显著抑制哮喘模型小鼠气道炎症和气道反应性,但二者在BCG对哮喘的干预作用中谁占主要地位,BCG复方组分的最适比例及其作用机制探讨有待进一步明确。目前哮喘模型建立的方法各异,本实验首先建立稳定的哮喘模型,观察不同激发方式对小鼠过敏性哮喘模型的影响。在此基础上,研究BCG-DNA及BCG-PSA不同复方比例对小鼠哮喘模型气道炎症及气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR)的影响,探讨BCG组分最适复方配比。第一部分不同激发方式对过敏性哮喘小鼠模型的影响目的探讨不同激发方式对过敏性哮喘小鼠模型的影响。方法哮喘模型组采用卵蛋白(OVA)致敏和激发BalB/c小鼠,第0、7、14d腹腔注射20μgOVA+150μl Al(OH)3+50μlNS(100μg/ml)混悬液致敏,从第28d开始分别给予不同次数和方式的激发。根据激发方式的不同,分别采用1%OVA溶液雾化和50μl激发液(2mg/mlOVA-NS溶液)滴鼻,随机分为5组,包括三次滴鼻激发组(In.3d)、两次雾化20min激发组(Ae.2d-20)、三次雾化20min激发组(Ae.3d-20)、三次雾化30min激发组(Ae.3d-30)、四次雾化20min激发组(Ae.4d-20),每组12只。各组激发后48h采用整体体积描记法检测小鼠气道反应性。观察300μl倍增浓度的乙酰甲胆碱(Mch)雾化激发后增强的呼气间歇(enhanced pause,Penh)的变化,将每个Mch激发浓度下的Penh值转换为与生理盐水(NS)激发时Penh值的百分比(Mch激发的Penh值/NS激发的Penh值×100%),以Penh%表示,作为小鼠气道反应性的评价指标。测定肺功能后再用PBS缓冲液对全肺进行支气管肺泡灌洗(BAL),对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学分析。结果所有哮喘组气道反应性(Penh%)和BALF嗜酸性粒细胞比例(Eos%)与正常组相比均有显著差异(P<0.05)。In.3d组Eos%和Penh%显著高于其它雾化激发组(P<0.05),其中In.3d组BALF Eos%(46.30%±4.55%)显著高于Ae.2d-20组(31.19%±12.84%)、Ae.3d-20组(29.00%±12.33%)及Ae.4d-20组(37.08%±8.44%) ,与Ae.3d-30组(41.17%±8.78%)无显著差异。In.3d组在雾化乙酰胆碱3.125mg/ml时,气道反应性显著高于Ae.2d-20组和Ae.4d-20组。In.3d组激发过程中动物死亡2只,其余各组均无死亡。结论OVA滴鼻和雾化激发均能成功建立过敏性哮喘小鼠模型,其中滴鼻激发建立的哮喘模型气道炎症及气道反应性升高更为显著和稳定。第二部分BCG-DNA和BCG-PSA不同复方比例对哮喘小鼠气道炎症和气道反应性的影响目的观察BCG核酸(DNA)和多糖(PSA)不同复方比例对哮喘小鼠气道炎症及气道反应性的影响。方法1.哮喘模型制作采用卵蛋白(OVA)致敏和滴鼻激发,方法同前。Balb/c小鼠随机分为正常对照组、激素组、哮喘对照组、DNA10组、PSA10组、斯奇康组、PSA/DNA不同复方比例干预组。激素组每次激发前1h腹腔注射地塞米松5mg/kg。斯奇康组和BCG复方组分干预组在第一次OVA致敏前7d腹腔注射干预药物。正常组不予任何处理。2. BCG-DNA和BCG-PSA复方干预组根据不同复方配比进行随机分组,具体分组如3.激发后48h采用整体体积描记法检测小鼠气道反应性,将Penh%作为其气道反应性评价指标。测定肺功能后进行支气管肺泡灌洗,离心沉淀作细胞学分析,上清留做细胞因子IFN-γ检测,肺组织行HE染色病理学检查。结果1. BCG-PSA为主的BCG复方组分干预组BCG-PSA为主的BCG复方组分干预组均能显著抑制哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应性。P/D(10/1)组(41.48%±9.83%)、P/D(40/10)组(43.05%±5.90%)、P/D(100/40)组(42.58%±5.37%)BALF Eos%还显著低于斯奇康组(50.55%±14.28%)、DNA10组(50.53%±8.13%)和PSA10组(49.50%±4.35%)(P<0.05)。2.BCG-DNA为主的BCG复方组分干预组BCG-DNA为主的BCG复方组分干预组均可显著抑制哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应性。P/D(1/10)组(44.15%±7.76)、P/D(10/40)组(43.35%±5.74%)、P/D(40/100)(45.55%±2.45%)组BALF Eos%显著低于斯奇康组(50.55%±14.28%)(P<0.05)。P/D(10/40)组还显著低于DNA10(50.53%±8.13%)和PSA10 (49.50%±4.35%)(P<0.05)。P/D(40/100)组在Mch为0.78、3.125、6.25mg/ml时Penh%显著低于斯奇康组,在Mch6.25-25 mg/ml时Penh%显著低于DNA10(P<0.05)。3. BCG-PSA/BCG-DNA=1:1干预组3.1除P/D(1/1)组,其余P/D=1:1组均能显著抑制哮喘气道炎症,P/D(40/40)组(40.5%±7.97%)和P/D(100/100)组(44.35%±4.16%)的气道炎症还显著低于斯奇康组(50.55%±14.28%)、DNA10(50.53%±8.13%)和PSA(49.50%±4.35%)(P<0.05)。BCG-PSA/BCG-DNA=1:1干预组均能显著抑制哮喘小鼠气道反应性。P/D(40/40)和P/D(100/100)组Penh%显著低于P/D(1/1)、P/D(10/10)、斯奇康组(P<0.05)。P/D(100/100)组Penh%(Mch6.25-50mg/ml)显著低于DNA10,Penh%(Mch1.56、50mg/ml)显著低于PSA10(P<0.05)。3.2 P/D(40/40)组(24.42pg/ml±3.95pg/ml)和P/D(100/100)组(26.96pg/ml±7.98pg/ml) BALF上清IFN-γ显著高于哮喘组(18.18pg/ml±6.06pg/ml)(P<0.05)。结论1. BCG复方组分能降低哮喘小鼠的气道高反应性,减轻气道炎症,以40μg、100μg为基础的等比复方组分早期干预效果显著优于BCG单一组分和斯奇康。2. BCG复方组分干预使哮喘小鼠肺内IFN-γ的水平显著增加。