邻苯二甲酸二丁酯(DBP)属于邻苯二甲酸酯类化合物的一员。主要用作硝基纤维素漆的增塑剂,也可作为聚氯乙烯和聚醋酸乙烯等塑料的增塑剂。同时是防沫剂、乳胶粘合剂以及纺织纤维润滑剂的工业原料,还可用作染料和杀虫剂的溶剂。这些材料广泛用于制造我们的日常生活用品,例如：塑料制品、油漆、胶水、驱虫剂、香水、发胶、指甲油等。DBP可在其生产或掺入到塑料、粘合剂和染料的过程中释放到环境。另外由于DBP不与终产品共价结合,随着使用时间的推移,可不断地释出进入到环境。环境中的DBP可通过呼吸、饮食以及皮肤接触等多种途径进入人体。近年来,DBP被认为是一种环境内分泌干扰物,具有生殖毒性、发育毒性以及潜在的致癌性等。为了更好测定DBP在环境中的污染水平以及评价暴露于环境中的DBP产生的潜在不利影响,必须建立一种快速、简便、灵敏、费用低廉的方法检测DBP在环境和生活用品中的残留量。目前国内外对DBP的监测方法主要有气相色谱-质谱联用(GC-MS)和高效液相色谱法(HPLC)等技术,但这些分析方法对仪器条件要求高,前处理的操作过程相对复杂、耗时。免疫分析特别是酶联免疫吸附分析(ELISA)由于不需要昂贵的仪器设备,且特异性强、灵敏度高、操作简便快捷,在现场筛选和大量样本的快速检测中显示了其独特的优势。本研究以4-硝基邻苯二甲酸和正丁醇为原料,经过酯化、还原合成了具有DBP结构特征的半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丁酯(DBAP)。用重氮化法将DBAP与卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶联得到人工抗原DBAP-OVA和DBAP-BSA。用DBAP-OVA免疫BALB/c小鼠获得了高效价、高灵敏度的抗血清。利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选出了1株能稳定分泌抗DBP抗体的杂交瘤细胞株DBP-4E9,其染色体数目为96～105条,分泌抗体的亚型为IgG1。小鼠腹水法大量制备的DBP单抗经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化,纯度为91.1%,回收率为68.3%。基于此单抗的ELISA最适检测条件是：以1%OVA作封闭剂；竞争反应体系为含10% DMF、1.6% NaCl、0.1% BSA的0.01 mol/L pH6.8磷酸盐缓冲液；25℃竞争反应1.5h。建立的人工抗原包被间接竞争ELISA在包被抗原DBAP-BSA浓度为0.25μg/mL,单抗工作浓度为62.5 ng/mL时,对DBP的线性检测范围是11.56～863.72μg/L,最低检测限(LD)为(9.21±1.28)μg/L。此外还建立了一种新颖的半抗原包被间接竞争ELISA检测DBP的含量。首先用酸性高锰酸钾将聚苯乙烯酶标板表面氧化衍生出羧基,再将半抗原DBAP通过水溶性碳二亚胺(EDC)共价交联到羧化的聚苯乙烯酶标板上。在DBAP包被,单抗工作浓度为500 ng/mL时,此法灵敏度比人工抗原包被间接竞争ELISA提高了10倍,线性检测范围是2.16～155.92 gg/L,LD可达(0.93±0.20)μg/L。所获得的DBP单抗除了与邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)和半抗原DBAP有一定的交叉反应(分别为21.5%和27.1%),而与其它常用的几种邻苯二甲酸酯类化合物均无交叉反应。用所建立的半抗原包被间接竞争ELISA对自来水和东湖水样进行的DBP添加回收试验结果显示,回收率分别为90.5～102.7%和92.4～100.5%。检出某品牌食品保鲜袋、一次性塑料杯和指甲油中DBP含量分别为(1.60±0.22) mg/kg、(1.91±0.21) mg/kg和(0.43±0.03) mg/kg。检测灵敏度和准确性可以满足水环境中DBP的残留检测要求,并可用于塑料制品和化妆品中DBP含量的检测。