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激光诱导自体荧光（Laser induced auto-fluorescence，LIAF）光谱是近年发展起来的肿瘤诊断新方法，与其它传统诊断方法相比，具有灵敏、快速、简便、无创及无毒副作用等优点。 目前，该诊断技术在肺癌诊断中，国内外已有较广泛的基础和临床研究，而消化道癌特别是大肠癌的自体荧光光谱较复杂，国内外研究较少，且目前的研究大多处于实验阶段，各自定的诊断标准也有较大差异，作为临床诊断技术尚不够成熟，还有待于实验研究积累数据寻求规律，以制定实用可靠的诊断标准。 本研究在国家“九五”科技攻关项目（编号：96-901-07-04）及国家“十五”科技攻关项目（编号：2001BA706B-15）的资助下，采用基础理论与临床实验研究相结合的方式，深入研究激光诱导自体荧光光谱技术用于大肠癌早期诊断的理论与实际问题，探讨大肠癌激光诱导自体荧光光谱规律及其分子生物学基础，并在此基础上进行了初步临床研究，为早期诊断从而早期治愈大肠癌提供理论基础。 一、激光诱导自体荧光光谱区分大肠癌组织与正常大肠组织 目的：探讨应用激光诱导自体荧光（LIAF）光谱方法诊断大肠癌的可行性，并确立判断依据。方法：收集32例大肠癌手术切除的离体标本及相对应的正常大肠组织。采用Nd：YAG三倍频调Q激光器（波长380nm）和光学多道分析仪（OMA），观察大肠癌标本的激光诱导自体荧光光谱，根据大肠癌组织和正常大肠组织的激光诱导自体荧光光谱特征规律，寻找能够区分两者的光谱差异，得出判断依据，并与病理切片检查结果比较。结果：1、大肠癌组织和正常大肠组织的LIAF光谱形状相似，均为双峰结构，大肠癌组织LIAF光谱强度及主、次峰强度明显低于正常大肠组织（P＜0.001）。2、LIAF光谱主峰波长475nm，次峰波长550nm，且部分大肠癌组织在640nm处，荧光光谱强度高于正常大肠组织。3、去除背景光后取上述各点集成荧光强度比值X1=(I475-I550)／I640，X2=I475／I640，X3=I550／I640为参数，采用改进的神经网络模型，建立数学判别方程W=（（6.184375*X1）2+（1.987699*X2）2+（2.965413*X3）2）1/2+0.2，若W≥12判为正常大肠组织，若W＜12判为大肠癌组织。采用100个抽样标本进行模型检验，识别的准确率为94％。结论：激光诱导自体荧光（L工AF）光谱可用于区分正常大肠组织与大肠癌组织。二、大肠癌组织激光诱导自体荧光光谱规律及自体荧光产生机制目的:探讨大肠癌组织激光诱导自体荧光（L工AF）光谱规律以及自体荧光产生的机制。方法:以Nd:YAG三倍频调Q激光器（波长380nm）和光学多道分析仪（OMA）系统，自正常大肠组织至癌组织，分别连续检测10例大肠癌手术标本的LIAF光谱（包括正常大肠组织、癌旁组织及癌组织），同时检测正常大肠组织各层（粘膜层、粘膜下层、肌层）LIAF光谱，并在激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）下分别观察正常大肠组织与癌组织的荧光强度及其显微自体荧光图像。结果:LIAF光谱强度自正常大肠组织经癌旁至癌组织逐渐降低，并有显著性差异（P<0.01），主、次峰波长及形状差别不大（P> .05）;大肠组织各层LIAF光谱形状相似，强度不同，正常大肠组织粘膜下层自体荧光光谱强度最强，肌层次之，粘膜层及癌组织最弱;双光路激光扫描共聚焦显微镜观察结果:正常大肠组织粘膜下层荧光（106.78）最强，肌层荧光（85.14）次之，而粘膜层（46.75）与癌组织（44.12）的荧光最弱;显微自体荧光图像显示:正常大肠组织各层均以绿色荧光为主，粘膜层、粘膜下层和肌层的绿/红荧光相对强度之比分别为3.58:1、5.96:1和3.12:1，大肠癌组织的红色荧光强度明显增加，绿/红荧光相对强度之比为1.26:1，与正常大肠组织各层比较均有显著性差异（P<0.01）。结论:自正常大肠组织经癌旁至癌组织L工AF光谱强度逐渐降低;正常大肠组织粘膜下层LIAF光谱强度最强，肌层次之，粘膜层及癌组织最弱;显微自体荧光图像显示正常大肠组织各层均以绿色荧光为主，粘膜下层最为明显，癌组织以红色荧光为主;正常大肠组织L工AF主要来源于粘膜下层组织的绿色荧光，癌组织的低荧光与其粘膜下层荧光物质减弱及粘膜厚度增加有关。三、大肠癌组织与正常大肠组织激光诱导自体荧光光谱差异的分子生物学基础目的:从m朋A和蛋白质水平研究大肠癌组织和正常大肠组织I、I工I、IV型胶原的表达差异，进一步探讨大肠癌组织和正常大肠组织的自体荧光光谱差异的分子生物学基础。方法:收集10例大肠癌组织与相应正常大肠组织离体标本，分别用RT一PcR和westernBI。tting检测I、I工I、IV型胶原三者之间mRNA和蛋白质的表达，并通过统计分析其表达差异。结果:RT一PCR和Western Blotting的结果提示工、H工、工V型胶原在大肠癌组织和正常大肠组织中均有表达，而且在大肠癌组织中以上三种胶原的表达均下调，其中工型胶原和工H型胶表达下调不明显（P>0.05），IV型胶原表达下调明显（P<0.01）。结论:工、工工工、IV型胶原在大肠癌组织和正常大肠组织中均有表达，lV型胶原表达的下调是大肠癌组织中自体荧光减弱的主要原因之一。四、在体大肠癌组织激光诱导自体荧光光谱特征及其与离体标本的比较研究目的:探?