【摘 要】
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玉米(Zea mays L.)是我国主要的秋粮作物。在干旱胁迫下玉米植株体内发生多种复杂的生理变化,甚至造成多重伤害。因此,研究干旱胁迫下相关基因的功能,对探究植物响应逆境胁迫的分子机制和抗逆分子育种具有重要意义。本研究以耐旱玉米自交系豫882为试验材料,进行干旱复水胁迫处理,通过Illumina高通量测序分析。从转录组结果中获得8个ZmPP2C家族基因,根据差异表达分析,筛选出ZmPP2C2、Z
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玉米(Zea mays L.)是我国主要的秋粮作物。在干旱胁迫下玉米植株体内发生多种复杂的生理变化,甚至造成多重伤害。因此,研究干旱胁迫下相关基因的功能,对探究植物响应逆境胁迫的分子机制和抗逆分子育种具有重要意义。本研究以耐旱玉米自交系豫882为试验材料,进行干旱复水胁迫处理,通过Illumina高通量测序分析。从转录组结果中获得8个ZmPP2C家族基因,根据差异表达分析,筛选出ZmPP2C2、ZmPP2C3、ZmPP2C6 3个ZmPP2C家族成员,对其进行克隆、组织特异性和不同非生物胁迫下的表达模式分析;亚细胞定位、酵母双杂交技术的互作蛋白分析以及拟南芥遗传转化的功能分析,主要研究内容及结果如下:1、对8个ZmPP2C家族基因进行编码蛋白理化性质、进化关系和基因结构等方面进行分析。结果表明:8个ZmPP2C基因分布于2、3、5、7、8、9、10染色体上;编码PP2C蛋白C端比N端更保守,且含有PP2C类蛋白催化区域专有的11个保守亚区;ZmPP2C蛋白均与一一对应的高粱PP2C蛋白亲缘关系较近;ZmPP2C、ZmPP2C2、ZmPP2C3、ZmPP2C6、ZmPP2C9、ZmPP2C48均含有3个内含子和4个外显子,ZmPP2C20有4个内含子和5个外显子,而ZmPP2C16只有一个外显子;根据基因差异表达结果,从中筛选出ZmPP2C2、ZmPP2C3、ZmPP2C6基因作为研究对象。2、荧光定量RT-PCR结果显示:ZmPP2C2、ZmPP2C3、ZmPP2C6基因在玉米组织中呈现相似的表达趋势,其中在根的表达量最高,其次是叶,茎中最低;在干旱(20%PEG6000)、外源ABA(100μmol/L)、高盐(200 mmol/L)、高温(37℃)处理下,ZmPP2C2、ZmPP2C3、ZmPP2C6基因均呈上调表达。PEG处理,ZmPP2C2基因于4 h达到最大值,ZmPP2C3、ZmPP2C6基因均在12 h达到最大值;ABA处理,ZmPP2C2基因处理后的表达量相对比较稳定,ZmPP2C3基因在48 h达到最大值,ZmPP2C6基因的表达相对波动较大;高盐处理,ZmPP2C2基因于4 h达到最大值,ZmPP2C3基因在12 h表达量急剧升高,ZmPP2C6基因的表达相对比较稳定,于8 h受诱导表达量最大;高温处理,ZmPP2C2与ZmPP2C6基因于2 h达到最大值,ZmPP2C3基因在8 h受诱导表达量最大。3、通过农杆菌侵染烟草,进行亚细胞定位分析。结果表明ZmPP2C2基因编码的蛋白定位在细胞核与细胞膜,ZmPP2C3、ZmPP2C6基因编码的蛋白均定位于细胞核。4、酵母双杂结果显示,ZmPP2C2有3个在物理上存在互作的基因分别为:GRMZM2G093032、GRMZM2G180916、GRMZM2G026807;ZmPP2C3有5个物理上存在互作的基因分别为:GRMZM2G180625、GRMZM2G038126、GRMZM2G155242、GRMZM2G110408和GRMZM2G069651。5、构建过表达载体p BI121+ZmPP2C2、p BI121+ZmPP2C6,用花絮侵染法侵染模式植物拟南芥,经PCR检测,获得转基因阳性植株。
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