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减蛋综合症(Egg Drop Syndrome,EDS-76)是由减蛋综合症病毒(EDSV)引起的一种以产蛋鸡产薄壳蛋或无壳蛋,产蛋率严重下降为主要特征的传染病,该病在世界范围内的发生和流行给养鸡业带来了巨大的经济损失。所以需要一种准确、简便的诊断方法来对该病做出诊断,也需要通过分析病毒的抗原成分筛选出合适的肽段作为亚单位疫苗用于本病的免疫预防,但这种诊断试剂和亚单位疫苗的研制,必须建立在病毒蛋白抗原结构的研究之上。本研究利用重组克隆载体pMD18-T-Hexon作为截短表达片段PCR扩增的模板,对EDSV Hexon蛋白的优势抗原表位进行筛选,从而对EDSV的抗原结构有了进一步的了解。为了分析减蛋综合症Hexon蛋白的优势抗原表位区,采用基因重叠分段表达技术,设计了6个覆盖整个减蛋综合症病毒Hexon蛋白的多肽片段,这些短肽长为150~170个氨基酸,有15~20个氨基酸重叠,将这些亚克隆的基因片段插入原核表达载体pET-30a中,分别进行融合表达,对表达的6个融合蛋白进行切胶纯化,应用EDSV阳性血清对表达的6个重组蛋白的抗原性进行了检测,经过Western blot分析表明,融合蛋白HB(153~306)、HD(443~618)和HE(598~769)能被EDSV阳性血清所识别,鉴定表明153~306、443~618和598~769为减蛋综合症病毒Hexon的优势抗原表位区。根据以上试验结果,进一步设计了6个覆盖HB(153~306)的多肽片段,13个覆盖HDE(443~769)的多肽片段,这些短肽长为35~40个氨基酸,有15个氨基酸的重叠,将这些亚克隆的基因片段插入原核表达载体pET-32a中,分别进行融合表达及切胶纯化,经Western blot结果表明,表达的融合蛋白HB-3(193~229)、HB-4(216~255)、HDE-3(491~530)、HDE-5(539~577)、HDE-9(633~671)和HDE-10(657~696)能被EDSV阳性血清所识别。最后,我们进一步缩小Hexon蛋白优势抗原表位区的氨基酸数,设计了5个覆盖HB-3(193~229)、3个覆盖HDE-3(491~530)、3个覆盖HDE-5(539~577)和5个覆盖HDE-910(633~696)的多肽片段,每一个多肽片段合成一对寡聚核酸片段,经磷酸化退火后插入表达载体pET-32a进行融合表达及切胶纯化,经Western blot确定减蛋综合症病毒Hexon蛋白优势抗原表位区位于204~219、227~243、491~506、550~565、633~648和656~672氨基酸处。综合上述实验结果,减蛋综合症病毒Hexon蛋白优势抗原表位区位于204~219、227~243、491~506、550~565、633~648和656~672区域。在此基础上对减蛋综合症病毒Hexon蛋白抗原表位的分布进行分析,同时利用DNAMAN序列分析软件将EDSV Hexon的抗原表位区与其他腺病毒六邻体蛋白的氨基酸序列进行比对,为进一步了解EDSV抗原结构奠定了基础。