根癌农杆菌介导番茄抗病基因Tm-2<'2>转化马铃薯的研究

来源 :重庆大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chjj1988mm
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
马铃薯是世界上产量仅次于小麦、玉米和水稻的第四大粮食作物,其单位面积单位时间的产量高于前三种作物。马铃薯粮菜兼用,营养丰富,联合国充分肯定了马铃薯在确保世界粮食安全和消除贫困中起的重大作用,并确定2008年为“国际马铃薯年”。但病毒侵染一直是导致马铃薯品种退化的主要因素,严重影响马铃薯的产量和品质。传统的育种方式已经不能满足马铃薯生产的需要,不能从根本上长期解决马铃薯病毒害问题。近年来,随着基因工程的迅速发展和转基因技术体系的日益完善,基因工程技术在提高马铃薯抗病性方面(尤其是抗病毒)显示了极大的潜力,必将成为马铃薯抗病毒育种的主要手段。   本文研究是根据已知番茄抗病基因Tm-22抗病机理及其功能,以及番茄抗病基因Tm-22转化茄科植物烟草并对侵害茄科植物的病毒(如TMV、ToMV等)具高抗特性的报道,利用番茄与马铃薯亲缘关系较近特点,采用基因工程技术将Tm-22基因转入马铃薯,筛选、鉴定已表达Tm-22基因的转基因马铃薯,分析其对危害马铃薯常见病毒的抗性。实验所取得的主要结果如下:   1、根据己报道的番茄抗性基因Tm-22设计特异性引物通过RT-PCR扩增得到2段部分Tm-22基因片段,再通过酶切和连接得到全长Tm-22基因序列,经比对证实KBV为含Tm-22基因的番茄品系。进一步证实番茄品系KBV对侵染茄科作物的病毒TMV、ToMV有很高的抗性是Tm-22基因表达所赋予的。   2、利用CaMV35S启动子和Tm-22基因的DNA全长序列,构建出番茄Tm-22基因用于超表达的双元载体pBIN19-Tm-22,再将该表达载体转化到根癌农杆菌LB4404中。   3、对己报道的试管薯诱导技术进行简单的改进,即转接入诱导培养基的马铃薯组织不经过光照培养直接进行黑暗处理,能在较短的时间里诱导出试管薯。   4、以诱导出来的试管薯切片做转化受体,将含双元载体pBIN19-Tm-22的根癌农杆菌工程菌对其侵染转化,在含有75mg.L-1卡那霉素的选择培养基上,2-3周可产生抗性芽,4-5周获得完整的转基因植株。最后生根筛选得到能够生根的抗性植株,且PCR检测结果为阳性,抗性株含超表达载体上特有的NPTⅡ基因。
其他文献
河流对于人类生存与社会经济的发展具有十分重要的作用,但是由于水污染与不当治理,造成河流生态功能退化,严重限制了社会经济发展,因此,迫切需要开展生态河道建设相关技术研
大坝风险分析是提高大坝安全水平,进行风险管理的基础,风险分析涉及人员组织、分析程序拟定、现场考察、资料搜集、失事概率和失事损失分析、评价方法和评价标准等诸多环节。本
混凝土材料力学性能较为复杂,其组成成分对混凝土的整体力学性能影响更为明显。通过基础力学试验可以较好的测出混凝土相关力学参数。但是由于条件限制,其试验数据的离散性较大
会议
  作为保证责任的承担方式之一,连带责任保证既可源于约定,也可源于法律推定,其在多方担保模式下的责任承担,也同样受到当事人约定或者法律规定(包括推定)的影响,并且,约定与法定
会议
土工格栅加筋挡土墙结构,由于具有良好的经济效益、施工简便、地基的适应性强、地基处理简单、抗振动性好、造型美观且无环境污染等特点,被广泛应用于公路、铁路、建筑、水利