淫羊藿多糖和糖蛋白的提取纯化、性质表征及其抗氧化、降血糖活性研究

来源 :陕西师范大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:sun806318188
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淫羊藿(Epimedium brevicornu)是我国特有的药食两用植物,在保健食品和医药工业中的应用广泛。许多古籍和中医著作中记载了淫羊藿调节血糖的功效,其是淫羊藿的重要生物活性之一。在民间,常将淫羊藿应用于糖尿病保健品中;在临床上,常用淫羊藿缓解糖尿病的症状。随着淫羊藿在降血糖方面关注度的提升,对其降血糖活性成分的研究也逐渐增多。相关文献表明,淫羊藿的降血糖功效与其所含的多糖、糖蛋白等成分有关。在文献调研的基础上,本文进行了淫羊藿多糖和糖蛋白的提取纯化、性质表征及其抗氧化、降血糖活性研究,为今后糖尿病保健食品的研发、淫羊藿资源的开发与应用、降血糖活性的研究提供一定的指导作用。采用超声波/微波协同提取法(UMSE)获取淫羊藿多糖(EbLP),正交试验优化提取工艺,得到UMSE的最优工艺为:粒度0.15×0.15 mm2,液固比30 mL·g-1,提取时间5 min。通过EbLP的全波长扫描试验、Molish试验、Fehling试验和碘-淀粉试验,可知EbLP为非淀粉多糖。对EbLP进行乙醇梯度分级,获得EbLP Ⅰ(乙醇体积分数为30%)、EbLP Ⅱ(乙醇体积分数为50%)和EbLP Ⅲ(乙醇体积分数为70%)。其中,EbLP Ⅱ对DPPH自由基和ABTS自由基有较好的清除作用,IC50值分别为0.42mg·mL-1和0.54 mg·mL-1;对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有良好的抑制作用,IC50值分别为24.0mg·mL-1和1.1×10-1 mg·mL-1。用不同剂量的EbLP Ⅱ对糖尿病模型小鼠进行21天的治疗实验,EbLP Ⅱ灌胃组模型小鼠和阴性对照组模型小鼠对比,有如下结果:1)灌胃800 mg·kg-1·d-1 EbLP Ⅱ组模型小鼠的饮食量和饮水量明显的降低(P<0.05),体重明显的增加(P<0.05)。2)EbLP Ⅱ灌胃组模型小鼠的空腹血糖值(FBG)和糖化血清蛋白含量(GSP)快速下降(P<0.05),基本维持在正常水平。3)EbLPⅡ灌胃组模型小鼠肝脏、肾脏的肿胀现象得到有效控制,肝脏系数和肾脏系数显著性降低(P<0.05)。4)EbLP Ⅱ灌胃组模型小鼠的丙二醛(MDA)含量显著降低,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力显著升高(P<0.05)。综上,EbLP Ⅱ可以提升机体清除自由基的效率,降低脂质过氧化的发生,保护和恢复小鼠损伤的组织与器官,发挥调节血糖值,缓解糖尿病症状的作用。通过浸泡提取及盐析沉淀获取淫羊藿糖蛋白,经透析、Seveg脱蛋白后进行柱层析纯化。不同大孔吸附树脂(AB-8、D101、XDA-1、X-5)对淫羊藿糖蛋白的静态吸附与解析试验表明:D101大孔吸附树脂对淫羊蕾糖蛋白具有优良的吸附与解析性能,小于3h便可达到吸附饱和状态。动态吸附动力学试验表明:最佳上样浓度为0.075mg·mL(以多糖计算),最佳上样流速为1.0BV·h-1。采用不同极性的溶剂洗脱层析柱,获得糖蛋白组分Ⅰ、组分Ⅱ、组分Ⅲ和组分Ⅳ。四组分淫羊藿糖蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明:组分Ⅱ中糖蛋白含量最高。近一步研究可知:组分Ⅱ糖蛋白的pI= 5.6;单糖组成为:葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖;且存在O-连接型糖肽键。且组分Ⅱ糖蛋白可高效清除DPPH 自由基和 ABTS 自由基,IC50 值分别为 1.49×10-2 mg.mL-1 和 3.80×10-2 mg·mL-1。其对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的抑制作用呈剂量依赖性,IC50值分别为1.15×10.1mg·mL-1和8.33×10-2 mg·mL-1。可见,组分Ⅱ糖蛋白有良好的抗氧化活性和抑制与血糖代谢相关酶的活性。综上可知,淫羊藿多糖、糖蛋白具有突出的降血糖活性;在缓解糖尿病并发症、调节糖尿病患者的血糖水平、提高机体的抗氧化能力等方面的效果显著,具有良好的开发潜力和发展前景。
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