论文部分内容阅读
在信号转导和转录活化因子STAT家族的各成员中,主要被IL-12激活的信号转导子和转录激活因子4(signal transducer and activator of transcription 4 STAT4)蛋白和被IL-4激活的信号转导子和转录激活因子6((signal transducer and activator of transcription 6 STAT6)蛋白被认为在Thl/Th2的分化调控及因此失调引发的各种炎症性疾病中发挥着重要的作用。研究表明,许多转录因子通过竞争与协同激活分子CBP(cAMP效应元件结合蛋白)结合。CBP在STAT4和STAT6介导的基因转录过程中起着重要作用,STAT4和STAT6可能通过竞争性结合CBP上有限的位点而影响靶基因转录。在本课题前期研究中,通过改变细胞内STAT4和STAT6的量,以CBP介导,首次从蛋白质的角度证明了STAT4/STST6存在竞争性抑制关系.目的:探讨两类重要核因子STAT4、STAT6在CBP介导下是否在功能活性存在竞争性抑制关系。超表达CBP是否能解除这种抑制。方法:构建含有能被STAT4特异性结合的IFN-γ启动子的表达载体pCAT3-IFN-γ,构建含有能被STAT6特异性结合的IL-4受体启动子区域的荧光素酶报告基因载体pGL3-IL-4R。用脂质体法将重组质粒及CBP表达质粒(由伦敦大学阮雄中教授友情馈赠)共转染Jurkat细胞。通过改变胞外细胞因子含量,分别激活STAT4和STAT6,采用荧光素酶(Luciferase, LUC)和氯霉素乙酰转移酶(chlorampbeniol acetyltransferase,CAT)报告基因检测系统分别测定LUC和CAT活性变化。增加CBP质粒转入量,再测定LUC和CAT活性变化。结果:经酶切和测序鉴定,重组质粒pCAT3-IFN-γ和pGL3-IL-4R构建成功。报告基因检测显示,在恒定的rhIL-4浓度条件下,增加rhIL-12浓度,LUC活性是逐渐降低的;反之,在恒定的rhIL-12浓度条件下,增加rhIL-4浓度,CAT活性是逐渐降低的,且有统计学上的线性相关关系。超表达CBP,分析线性回归方程的回归系数,无明显统计学意义。结论:STAT4活性逐渐增强时,STAT6与启动子结合诱导其转录的功能活性是下降的;STAT6活性逐渐增强时, STAT4与启动子结合诱导其转录的功能活性是下降的。提示转录因子STAT4和转录因子STAT6在功能活性上存在竞争性抑制关系。超表达CBP不能能解除这种抑制。