论文部分内容阅读
第一部分：泛素特异性肽酶22在胃癌中的表达及其临床意义目的：研究胃癌组织中泛素特异性肽酶22(USP22)的表达及意义。方法：使用免疫组化SABC法检测146例标本(100例胃癌、46例癌旁正常组织)中USP22的表达情况,并将表达情况与病例的临床病例资料相联系。结果：胃癌组织中USP22的阳性率为80%,阳性表达率明显高于正常组织。胃癌的分期与阳性表达呈正相关,胃癌的分化程度与阳性表达呈负相关。结论：USP22可能是胃癌新的分子标志物。第二部分：SiRNA沉默USP22基因对胃癌细胞增殖的抑制作用目的：研究胃癌细胞中沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase22,USP22)的表达后其增殖的影响。方法：设计三条siRNA及阴性siRNA针对USP22基因,采用脂质体Lipofectamine2000转染胃癌AGS细胞,Realtime-PCR检测转染后AGS细胞中USP22mRNA表达水平；Western-blot检测转染后AGS细胞中USP22蛋白质表达水平的变化情况；采用流式细胞术检测细胞周期分布变化；采用CCK8法检测细胞增殖率及抑制率。结果：在转染48小时后,三段干扰的片段都能分别在mRNA和蛋白水平上有效的抑制USP22的表达,其中转染USP22siRNA3后效果最明显,USP22的mRNA表达下降了80.47%±2.99%；USP22的蛋白质表达下降了79.40%±3.58%。细胞增殖明显受到抑制,USP22siRNA3组胃癌细胞增殖抑制率为27.33%±3.49%。细胞周期的检测中G0/G1期细胞增多；S期细胞减少。结论：采用siRNA干扰技术可以有效的下调USP22基因的表达；显著抑制胃癌AGS细胞的增殖。