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神经病理性疼痛(neuropathic pain)是由于外周或中枢神经系统功能障碍引起的一种慢性疼痛,通常伴随异常性疼痛、痛觉过敏和自发性疼痛等特点。在有害刺激或神经损伤的情况下,受损部位的细胞因子合成和释放增加,激活细胞内的信号通路,导致疼痛的形成。肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)属于降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)超家族成员之一,是一种具有生物活性的促痛神经肽,激活AM受体从而参与疼痛调控过程。本实验室课题组已初步证实AM参与SNL诱导的神经病理性疼痛。但AM参与SNL诱导早期和晚期神经病理性疼痛的作用及机制尚未清楚。本研究通过建立大鼠L5脊神经结扎(SNL)模型,应用行为学、实时荧光定量PCR、Western Blot和免疫荧光双标技术探讨AM参与SNL诱导的早期和晚期神经病理性疼痛的作用及机制。实验结果显示:(1)SNL第2天和第10天,鞘内注射AM22-52能够减缓机械痛觉过敏,表明AM参与SNL诱导的神经病理性疼痛形成与维持过程。(2)SNL第2天,DRG中nNOS、TRPV1,脊髓背角中的IBA-1、IL-1β、TNF-α、CX3CL1、p38磷酸化表达增加,鞘内注射AM22-52能够抑制这些因子表达量的上升。表明AM可以调控DRG中的痛分子和脊髓小胶质细胞活动参与早期神经病理性疼痛形成。(3)SNL第10天,DRG中nNOS、TRPV1,脊髓背角GFAP、IL-1β、TNF-α、MCP-1、JNK磷酸化表达升高;鞘内注射AM22-52这些细胞因子表达量显著减少。表明AM调控DRG中痛分子和脊髓星形胶质细胞活动参与晚期神经病理性疼痛。(4)运用免疫荧光双标技术,结果显示AM及其受体元件CLR、RAMP2能够分别与DRG中的nNOS、TRPV1共定位表达。为AM可调控两者表达参与神经病理性疼痛提供了解剖学依据。综上所述,本课题的实验结果表明AM调节DRGnNOS、TRPV1等细胞因子的活性,进而调控脊髓背角胶质细胞(小胶质细胞、星形胶质细胞)发生改变,从而参与神经病理性疼痛的形成和维持,为阐明AM参与神经病理性疼痛早期和晚期提供了实验依据及奠定理论基础。