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目的:结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是导致结核病(Tuberculosis,TB)的病原菌,其感染后主要寄生于巨噬细胞中。巨噬细胞是先天性免疫系统中的一员,细胞膜表面、胞内器室膜上存在模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)可以识别病原菌,PRR识别病原菌后,通过蛋白间的级联反应,激活与免疫应答相关的信号通路,产生细胞因子,进一步激活适应性免疫应答,使机体形成一个完善的免疫应答网络,从而更有效的消灭病原菌。本实验主要研究卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG)感染RAW264.7细胞后,microRNA-29a(miR-29a)对其激活的Toll样受体4/髓样分化因子88(Toll-like receptor 4/Myeloid differentiation factor88,TLR4/MyD88)信号通路是否具有调控作用,为结核杆菌的致病机理或药物靶标的发掘提供实验依据。方法:设置六个实验组,分别是空白对照组、miR-29a抑制载体转染组、空载转染组、BCG感染组、BCG+miR-29a抑制载体转染组、BCG+空载转染组,用荧光定量PCR方法检测TLR4/MyD88通路相关基因TLR4、MyD88、TRAF6、丝裂原激活蛋白激酶激酶4(Mitogen-activated Protein Kinase Kinase 4,MAP2K4)、转录激活因子-1(Transcription Activitor-1,AP-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)和肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的mRNA表达情况;用Western blot方法检测通路关键激酶MAP2K4和转录因子AP-1的总蛋白和磷酸化蛋白表达情况;用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α的表达量。结果:BCG感染RAW264.7细胞24h时,miR-29a的表达量上调,TLR4/MyD88信号通路相关基因(TLR4、MyD88、TRAF6、MAP2K4、AP-1、IL-6、IL-12和TNF-α)的mRNA表达量也均上调;抑制miR-29a表达后,再用BCG感染RAW264.7细胞,用荧光定量PCR方法检测发现TLR4、MyD88、TRAF6、MAP2K4、AP-1、IL-6和IL-12的mRNA表达量下调,而TNF-α的mRNA表达量上调;用ELISA方法检测细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α,结果显示miR-29a对IL-6、IL-12和TNF-α的蛋白表达水平无明显影响作用;Western blot检测MAP2K4和AP-1,结果显示miR-29a对MAP2K4和AP-1的蛋白表达水平无明显影响作用。结论:miR-29a对TLR4/MyD88信号通路相关基因的表达在mRNA水平上有影响作用,在蛋白水平上无明显影响作用。