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目的据报道,心肌细胞坏死是心肌梗塞,缺血/再灌注和心力衰竭等心脏病的主要发病机理,故心肌坏死是预防和治疗心脏病的重要治疗靶点。Hsc70羧基末端反应蛋白(CHIP)可以通过其E3泛素连接酶功能发挥保护作用,但CHIP是否能够抑制氧化应激诱导的心肌坏死鲜有报道。黄芩素能够通过抑制心肌细胞氧化应激和凋亡来发挥心脏保护作用,但黄芩素是否能够通过抑制心肌坏死来发挥保护作用至今未有报道。本研究旨在探究黄芩素是否能够通过抑制坏死来发挥心肌保护作用,以及该作用是否是通过稳定CHIP对RIPK1和RIPK3的降解来抑制心肌坏死的发生。方法使用PI染色、TUNEL染色以及LDH释放量检测的方法,检测黄芩素在细胞水平上对过氧化氢引起心肌损伤的保护作用。通过western blot、qPCR、免疫共沉淀的方法验证RIPK1/RIPK3在过氧化氢诱导的心肌坏死中发挥重要作用。同时,使用RIPK1/RIPK3的siRNA进一步证明它们是坏死发生的重要相关蛋白。采用western blot和免疫共沉淀的方法探究黄芩素是否能够通过抑制RIPK1/RIPK3坏死复合物的形成而抑制心肌坏死的发生。使用western blot和qPCR实验方法探究在过氧化氢诱导的心肌坏死中CHIP表达量的变化。此外,通过敲低和过表达CHIP蛋白以及泛素化水平的检测,进一步探究该蛋白是否能够通过泛素化降解RIPK3进而调控过氧化氢诱导的心肌坏死。运用分子对接技术对黄芩素与CHIP的结合位点进行预测,同时,在细胞水平上检测泛素化水平进一步探究黄芩素是否能够促进CHIP蛋白发挥泛素连接酶作用。最后使用小鼠心梗模型在动物水平上做了PI染色、TUNEL染色以及TTC/Evans blue双染的实验,探究黄芩素是否能够在动物水平上显著抑制心肌损伤。结果在细胞水平上,与对照组相比,黄芩素处理组发生坏死、凋亡情况显著减少;siRNA的使用以及免疫共沉淀实验证明RIPK1/RIPK3形成的坏死复合物在过氧化氢诱导的心肌坏死中发挥重要作用,且在黄芩素处理组中,RIPK1/RIPK3的蛋白表达以及坏死复合物的形成被显著抑制;western blot实验结果显示在过氧化氢诱导的心肌坏死中CHIP蛋白表达发生显著变化,且敲低CHIP以及泛素化实验结果显示在心肌细胞中CHIP能够发挥E3泛素连接酶作用降解RIPK3蛋白,过表达CHIP以及PI染色实验结果证明外源性CHIP蛋白通过降解RIPK3来缓解心肌坏死情况;分子对接试验首次预测出黄芩素与CHIP蛋白的结合位点,泛素化实验结果进一步验证黄芩素促进CHIP蛋白的E3泛素连接酶活性;动物实验进一步证明黄芩素的心肌保护作用。结论黄芩素减轻细胞水平上过氧化氢诱导的心肌坏死;RIPK1/RIPK3参与过氧化氢诱导的心肌坏死的调节;黄芩素通过干扰RIPK1/RIPK3形成的坏死复合物减轻坏死细胞死亡;CHIP通过对RIPK1和RIPK3的泛素化依赖性降解抑制心肌坏死;黄芩素通过稳定CHIP缓解过氧化氢诱导的坏死;黄芩素能够与CHIP蛋白相互结合;黄芩素能够减轻动物水平上的心肌损伤。