【摘 要】
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背景根据最新调查数据显示,胃癌（gastric cancer,GC）新发病例数占所有新发癌症数目的第六位,也是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。近年研究发现过氧化物酶体膜蛋白4（peroxisomal membrane protein 4,PXMP4）在前列腺癌、肺癌和结直肠癌的发生发展中发挥着重要作用,但是PXMP4在胃癌中的作用尚不清楚。本实验将研究PXMP4在胃
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背景根据最新调查数据显示,胃癌（gastric cancer,GC）新发病例数占所有新发癌症数目的第六位,也是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。近年研究发现过氧化物酶体膜蛋白4（peroxisomal membrane protein 4,PXMP4）在前列腺癌、肺癌和结直肠癌的发生发展中发挥着重要作用,但是PXMP4在胃癌中的作用尚不清楚。本实验将研究PXMP4在胃癌增殖、侵袭和迁移中的作用,为胃癌的诊断和治疗提供新的靶点。目的探究PXMP4在胃癌组织中的表达;以4株人胃癌细胞AGS、HGC-27、MKN-28和SGC-7901为研究对象,探究PXMP4对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法1.运用基因表达谱交互研究数据库（gene expression profiling interactive analysis,GEPIA）在线分析胃癌组织中PXMP4 m RNA的表达情况。然后通过Kaplan-Meier plotter（https://kmplot.com/analysis/）数据库分析胃癌患者在不同PXMP4表达组之间的总生存期（overall survival,OS）的差异,做出预后曲线。2.利用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）检测分析胃癌组织中PXMP4的表达情况,并分析PXMP4的表达与临床病理特征的相关性。3.Western blot和实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）法检测胃癌细胞中PXMP4蛋白质和m RNA的表达情况。构建PXMP4干扰/过表达细胞株并进行效率验证。4.利用CCK-8、Transwell和划痕愈合实验检测PXMP4干扰/过表达以后对胃癌细胞株增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果1.GEPIA数据库分析结果表明:PXMP4 m RNA在胃癌组织中的表达水平显著高于胃癌癌旁组织（P＜0.05）。通过Kaplan–Meier plotter曲线发现,胃癌中PXMP4高表达的患者总生存期更短,PXMP4低表达的患者总生存期较长（P＜0.05）。2.IHC结果表明:PXMP4主要定位于细胞浆和细胞膜上,呈棕黄色,在57例胃癌石蜡样本中,40例胃癌组织中PXMP4的表达高于其配对的癌旁组织（P＜0.05）;胃癌组织中PXMP4蛋白质表达量显著高于配对癌旁组织（P＜0.05）。3.Western blot和q RT-PCR结果表明,胃癌细胞中PXMP4在蛋白质和m RNA表达量从高到低分别是:HGC-27、AGS、SGC-7901、MKN-28,并成功构建PXMP4干扰/过表达细胞株（P＜0.05）。4.CCK-8增殖实验结果表明,干扰PXMP4组细胞（AGS和HGC-27）的生长速度显著慢于NC组（P＜0.05）,而过表达PXMP4组细胞（MKN-28和SGC-7901）的生长速度显著快于MOCK组（P＜0.05）。5.Transwell侵袭实验结果表明,干扰PXMP4组细胞（AGS和HGC-27）的细胞数量显著少于NC组（P＜0.05）,而过表达PXMP4组细胞（MKN-28和SGC-7901）穿透小室的细胞数量显著多于MOCK组（P＜0.05）。6.划痕愈合实验结果表明,在24 h和48 h分别拍照后显示:干扰PXMP4组细胞（AGS和HGC-27）的迁移速率显著慢于NC组（P＜0.05）,而过表达PXMP4组细胞（MKN-28和SGC-7901）的迁移速率显著快于MOCK组（P＜0.05）。结论1.PXMP4表达在胃癌组织中显著上升,其表达水平与肿瘤分化程度和有无淋巴结转移密切相关,与肿瘤大小、年龄和性别无关。2.PXMP4促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。
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