背景与目的:RNA干扰(RNAi,RNA interference)是一种通过细胞内导入双链RNA而抑制特异基因表达的,进化保守的转录后基因沉默现象(PTGS,posttranscriptional gene silencing),目前己证明RNAi可作为功能基因组学研究的重要工具。本文拟构建一以U6启动子为基础的,在细胞内表达短发夹状RNA(shRNA,short hairpin RNA)的DNA载体。利用壳聚糖转染,作为载体产生的shRNA在细胞内导致序列特异的基因沉默,观察其抑制肿瘤细胞的效应,同时为肿瘤基因治疗提供有效的载体。方法:以人乳腺癌细胞株MCF-7为模型,以在该细胞中高表达的XIAP为靶基因,研究本载体产生的shRNA抑制XIAP基因表达的效果,并观察其对肿瘤细胞凋亡和增殖能力的影响。用XIAP siRNA基因做报告基因,制备壳聚糖-XIAP siRNA复合体纳米粒,体外转染人乳腺癌细胞MCF-7,定性评价纳米粒的转染效率和细胞毒性。结果:U6启动子产生的shRNA在人细胞能抑制序列特异的基因表达。利用该载体产生的shRNA成功地将MCF-7细胞中的XIAP基因抑制到RT-PCR和Western blot检测不到的水平,并减低了肿瘤细胞的成瘤作用。壳聚糖XIAP siRNA质粒纳米粒能成功转染细胞并能抑制细胞生长。结论:成功构建了一个表达shRNA使特异基因沉默的DNA载体,通过RNAi抑制XIAP基因的表达能明显促进乳腺癌细胞的凋亡和抑制细胞增殖能力。壳聚糖纳米粒能作为载体,用于肿瘤细胞的转染,应用前景良好,但其对细胞的选择性、各种细胞不同的转染条件、剂量效应关系等需要进一步的探索。