重组人血管内皮抑素联合紫杉醇对高侵袭性胃癌细胞的作用及其机制的实验研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiujiejushi
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目的通过体外实验观察紫杉醇联合不同浓度恩度对高侵袭胃癌细胞生长的影响,同时观察两药间是否具有协同增效作用,并进一步研究其作用机制,为紫杉醇联合恩度治疗难治性胃癌的临床实践提供可靠的实验室依据。方法(1)体外培养人胃癌MGC803细胞,采用MTT法检测紫杉醇和恩度单药在不同浓度和作用时间下对MGC803细胞的增殖抑制作用,确定最佳剂量组合。用已确定的最佳剂量组合单独或联合治疗胃癌细胞MGC803,分为4组:对照组、紫杉醇组、恩度组、两药联合组。(2)采用MTT法检测紫杉醇和恩度单药及两药联合作用对胃癌细胞的增殖抑制作用;分别通过计算两药相互作用系数(CDI)反映不同组合药物间的相互作用性质。(3)通过Annexin-V FITC/PI双标记染色法检测各用药组对细胞系凋亡的影响。(4)采用Transwell小室法检测各实验组胃癌细胞的侵袭情况;(5)ELISA法检测紫杉醇和不同浓度恩度单药以及两药联合处理24h后MGC803细胞上清液中VEGF和MMP-2的水平。(6)运用WesternBlot法检测紫杉醇和不同浓度恩度单药以及两药联合处理24h后MGC803细胞中VEGF、MMP-2以及MMP-9的表达影响。结果(1)恩度和紫杉醇对胃癌MGC803细胞具有增殖抑制作用,两药联合具有相加效应。在紫杉醇单药组和联合组观察到时间和剂量依赖性,恩度单药组中仅发现剂量依赖性特征。(2)恩度和紫杉醇均能够促进胃癌细胞凋亡,且联合用药组作用最强,且具有剂量依赖性。(3)恩度和紫杉醇均能够减弱细胞侵袭能力,呈剂量依赖性,联合用药组作用最强。(4)恩度和紫杉醇均能够下调MGC803细胞上清液中VEGF、MMP-2细胞因子的表达水平,两者联合应用后可增强该作用。(5)恩度和紫杉醇可抑制细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,两者联合应用后抑制作用增强。结论体外实验证明,恩度联合紫杉醇可抑制MGC803增殖,呈相加效应,并具有诱导细胞凋亡作用。经不同浓度恩度处理后的MGC803细胞穿过重建基底膜的能力明显降低,呈剂量依赖性,恩度联合化疗药物显著降低胃癌细胞的侵袭转移能力。恩度和紫杉醇均能够下调细胞上清液中VEGF、MMP-2细胞因子的表达水平,联合作用更强。恩度和紫杉醇也明显下调了细胞内VEGF、MMP-2以及MMP-9蛋白表达,且随着恩度用药浓度的增加,各蛋白表达量下降越多。与此同时,MGC803细胞的侵袭转移能力减弱越明显。推测恩度可能通过阻断信号通路中的VEGF、MMP-2以及MMP-9的表达,发挥抗血管生成作用,从而抑制肿瘤侵袭、转移的发生。
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