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目的：1.探讨体外人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的分离、培养、纯化及鉴定方法。2.探讨TNF-a处理Caco-2细胞建立体外肠黏膜上皮损伤模型的方法。3.探讨血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)基因修饰的hUC-MSCs对受损肠黏膜上皮细胞的保护作用及其发挥这一作用的机制。方法：1.采用直接组织块法分离培养脐带间充质干细胞,用细胞表型、成脂成骨诱导分化方法鉴定：将带有荧光标记绿色荧光蛋白和HO-1基因的质粒与腺病毒重组,将重组的腺病毒转染入hUC-MSCs中,形成稳定表达的HO-1/hUC-MSCs,通过荧光显微镜下观察绿色荧光的含量和通过RT-PCR技术检测HO-1mRNA的含量来验证HO-1是否转染入细胞内并进行了过表达。2.采用Caco-2细胞来模拟肠粘膜上皮以期研究肠粘膜上皮细胞的一些结构和功能的变化。应用TNF-α处理Caco-2细胞建立肠粘膜上皮损伤模型。通过免疫荧光技术、RT-PCR技术和Western blot技术验证了本实验条件下TNF-α的最佳浓度和处理时间。3.将HO-1、hUC-MSCs及HO-1/hUC-MSCs通过Transwell、室进行间接共培养,采用RT-PCR技术证明了Ad-HO-1转入了细胞并进行了大量的表达,同时采用免疫荧光、RT-PCR及Western blot技术检测Caco-2细胞上紧密连接蛋白的形态及Occludin与ZO-1的含量变化,采用ELISA方法检测IL-10及IL-6等细胞因子的变化。结果：1.培养的第三代hUC-MSCs细胞大多数表达CD29-CD44,几乎不表达或很少表达CD34、CD45。2.分别应用INF-α以0μg/L、50μg/L、100μg/L和200μg/L的浓度及0h、6h、12h和24h的时间处理Caco-2细胞,通过免疫荧光技术、RT-PCR技术和Western blot技术验证了本实验条件下TNF-α的最适浓度是100μg/L,最佳处理时间是24h。3.实验分六组,第一组：单纯CaCo-2细胞；第二组：CaCo-2细胞+TNF-α；第三组：CaCo-2细胞+TN F-α+Ad-HO-1；第四组：CaCo-2细胞+TNF-α+hUC-MSCs；第五组：CaCo-2细胞+TNF-α+hUC-MSCs+Ad-HO-1:第六组：CaCo-2细胞+TNF-α+HO-1/hUC-MSCs。荧光显微镜下观察CaCo-2细胞间紧密连接蛋白的完整性发生变化,表现为紧密连接断裂,表达荧光数量减少：与第二组相比,第一、三、四、五、六组的红色荧光与绿色荧光均有所增加,且第六组明显多于三、四、五组；RT-PCR检测发现：与第二组相比,第一、三、四、五、六组的Occludin mRNA口ZO-1mRNA表达差异倍数都大于1,第六组与第三、四、五组相比,差异倍数也均大于1,具有统计学意义；Western blot检测发现：与第二组相比,第一、三、四、五、六组的Occludin和ZO-1蛋白表达量均增高,且第六组明显多于第三、四、五组,具有统计学意义；ELISA检测发现：与第二组相比,第三、四、五、六组的IL-6水平下降,而IL-10水平上升,尤以第六组最明显,有统计学意义,而第一组表达极低。结论：1.采用直接组织块法分离培养获得高纯度、高含量及状态好的脐带间充质干细胞；将带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白和HO-1基因的重组质粒并进行腺病毒包装后,将重组腺病毒转染入脐带间充质干细胞中,可以形成稳定表达的HO-1/hUC-MSCs。2.在体外用Caco-2细胞建立稳定的肠粘膜上皮模型。3.采用Transwell小室成功建立“目的细胞”与Caco-2细胞的间接共培养体系；HO-1、hUC-MSCs、HO-1+hUC-MSCs和HO-1/hUC-MSCs可以促进肠上皮紧密连接蛋白及mRNA的表达,降低炎性因子的释放和促进抗炎因子的释放,从而保护肠粘膜上皮细胞。而HO-1/hUC-MSCs对上述的保护作用强于单纯HO-1、hUC-MSCs及HO-1+hUC-MSCs。